/
/
بروتوكول محسن لتنقية ومباشرة أحادية الحيوية المؤتلف BDNF في أنبوب لدراسات الاتجار الخلوي في الخلايا العصبية
Se requiere una suscripción a JoVE para ver este contenido. Inicie sesión o comience su prueba gratuita.
1Department of Physiology, Faculty of Biological Sciences,Pontificia Universidad Católica de Chile, 2Department of Molecular and Cellular Biology, Faculty of Biological Sciences, Center for Aging and Regeneration (CARE UC),Pontificia Universidad Católica de Chile, 3Institute of Biomedical Sciences. Faculty of Medicine and Faculty of Life Sciences,Universidad Andrés Bello, 4Department of Neuromuscular Diseases, UCL Queen Square Institute of Neurology and UK Dementia Research Institute at UCL,University College London Campus
Capítulos
- 00:00Introdcution
- 00:48Transfection of HEK293 cells
- 01:49Media Collection and Storage
- 03:02Media Concentration and Purification
- 04:58In vitro Mono-biotinylation Reaction
- 06:01Biotinylation Analysis
- 06:56Visualization of Retrograde Axonal Transport of BDNF-QD in Live Neurons
- 07:58Represetative Results
- 13:17Conclusion
يتم إنتاج BDNF المؤتلف الذي يحتوي على تسلسل Avi (BDNFAvi) في خلايا HEK293 بطريقة فعالة من حيث التكلفة ويتم تنقيته بواسطة الكروماتوغرافيا المتقاربة. ثم BDNFavi هو مباشرة أحادية الحيوية مع إنزيم BirA في أنبوب. يحتفظ BDNFavi و BDNFavi أحادية الفينيل البيولوجية بنشاطهم البيولوجي عند مقارنتها بـ BDNF المتوفرة تجاريًا.
