चिकी भ्रूण में तंत्रिका प्रेरण के लिए परख
Summary
तंत्रिका प्रेरण मस्तिष्क के गठन में पहला कदम है. यह एक तंत्र है जिसके द्वारा Hensen (आयोजक) नोड, आसन्न ऊतकों को निर्देश एक तंत्रिका भाग्य अपनाने है, यानी तंत्रिका तंत्र को जन्म दे. इस वीडियो लड़की भ्रूण में तंत्रिका शामिल होने के लिए एक परख को दर्शाता है.
Abstract
लड़की भ्रूण जल्दी भ्रूण के विकास के अध्ययन में एक महत्वपूर्ण उपकरण है. इसकी पारदर्शिता, पहुंच, और हेरफेर की आसानी, यह और तंत्रिका तंत्र के प्रारंभिक patterning के गठन के अध्ययन के लिए एक आदर्श उपकरण बनाते हैं. इस वीडियो को दर्शाता है कैसे एक मेजबान में भ्रष्टाचार के आयोजक के ऊतकों को, जो एक विधि Hensen नोड (लड़की भ्रूण में आयोजक) एक मेजबान सक्षम बाह्य त्वक स्तर के लिए grafted है. आयोजक भ्रष्टाचार ना ऊतक ve न्यूरल उत्प्रेरण संकेतों के माध्यम से एक तंत्रिका भाग्य अपनाने overlying निर्देश देता है. इस तंत्र तंत्रिका प्रेरण के रूप में संदर्भित किया जाता है, और और amniotes में मस्तिष्क और रीढ़ की हड्डी के गठन में प्रारंभिक कदम का गठन किया है. इस पद्धति का अनिवार्य रूप से ख्यात लड़की में तंत्रिका उत्प्रेरण अणुओं के लक्षण वर्णन के लिए प्रयोग किया जाता है. इस वीडियो तंत्रिका शामिल होने के लिए परख में विभिन्न चरणों को दर्शाता है, पहला, donnor भ्रूण explanted है और एक डिश पर टिकी है. फिर, मेजबान भ्रूण नई संस्कृति के लिए तैयार है. भ्रष्टाचार excised है और मेजबान क्षेत्र pellucida मार्जिन में प्रत्यारोपित. मेजबान 18-22 बजे के लिए सभ्य है. विधानसभा और तय है और आगे अनुप्रयोगों (जैसे में स्वस्थानी संकरण) के लिए कार्रवाई की जाती है. इस पद्धति का मूल Waddington द्वारा तैयार किया गया था<sup1,2></sup> और Gallera<sup3,4></sup>.
Protocol
Discussion
यह वीडियो तंत्रिका शामिल होने के लिए एक परख प्रदर्शन में विभिन्न चरणों को दर्शाता है, यह परख ख्यात लड़की में तंत्रिका उत्प्रेरण अणुओं के लक्षण वर्णन के लिए अनिवार्य रूप से प्रयोग किया जाता है, और इस प्?…
Acknowledgements
डीपी रुथ Kirschstein पुरस्कार DA021977 01A1-1F32 के नशीली दवाओं के सेवन पर राष्ट्रीय संस्थान से प्राप्तकर्ता है. यह काम मार्गरेट एम. Alkek RHF फाउंडेशन द्वारा समर्थित किया गया.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Eggs | Animal | Charles River Laboratories | Premium Fertile | Fertilized, HH3+ (14 hr) |
| Stereomicroscope | Microscope | Leica Microsystems | MZ9.5 or similar | |
| Hybridization Incubator | Equipment | Robbins Scientific | M1000 | Use with inverted Pyrex dish and 500 ml ddH2O beaker |
| Marsh Automatic Incubator | Equipment | Lyon | RX | |
| Pyrex dish | ||||
| Watchmaker’s glass 50mm | Tool | VWR | 66112-060 | |
| Glass rings | Tool | Physical Plant facility | cut 4 mm thick sections of glass tubing (27 mm outer diam, 25 mm inner diam). Do not fine polish. | |
| Curved Forceps (1) | Tool | Electron Microscopy Sciences | 72991-4C | |
| Forceps (2) | Tool | Fine Science Tools | 11002-13 | blunt ended using sharpening Stone and 100ul mineral oil |
| Fine scissors | Tool | Fine Science Tools | 14161-10 | |
| Plastic dishes | Tool | Falcon | 353001 | |
| Rubber Bulb | Tool | Electron Microscopy Sciences | 70980 | |
| DiI | Reagent | Invitrogen | D-282 | |
| Aspirator tube assembly | Tool | Sigma | A5177-5EA | |
| Microelectrode puller | Equipment | Sutter Instruments | Sutter Instruments P-97 Flaming/Brown Micropipette | |
| Pasteur Capillary Pipette | Tool | Electron Microscopy Sciences | 70950-12 | round edge under flame |
| Culture chamber | Tool | Pioneer Plastics | 030C | |
| Microcapillary tube | Tool | Sigma | P1049-1PAK | |
| Microdissecting knife | Tool | Fine Science Tools | 10056-12 | Use to puncture cavities prior to in situ hybridization |
| Minuten pins 0.2mm diam | Tool | Fine Science Tools | 26002-20 | Mix 1 part Curing Agent, 9 parts Base; set O/N at 37C |
| Diethylpyrocarbonate (depc) | Reagent | Electron Microscopy Sciences | 15710 | |
| Sylgard 184 Silicon Elastomer Curing Agent and Base | Dow Corning | 0001986475 | Mix 1 part Curing Agent, 9 parts Base; set O/N at 37C | |
| Diethylpyrocarbonate (depc) | Acros Organics | 10025025 | Add 1ml depc to 1l PBS; shake; autoclave | |
| 16% PFA | Electron Microscopy Sciences | 15710 |
References
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- Waddington, C. H. Induction by the primitive streak and its derivatives in the chick. J. Exp. Biol. 10, 38-46 (1933).
- Gallera, J. Excision et transplantation des différentes régions de la ligne primitive chez le poulet. C. R. Ass. Anat. 49, 632-639 (1964).
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