骨髄の造血細胞のホーミング
Summary
この記事では、骨髄中の彼らのニッチへの造血細胞のホーミングを研究するために使用されるプロトコルについて説明します。
Abstract
ホーミングは、移植された造血細胞へ旅行し、生着または骨髄中の住居を確立することができるする現象です。様々なchemomkinesと受容体は造血幹細胞のホーミングに関与している。 [1、2]
本論文では、造血幹細胞の研究で使用される古典的なホーミングプロトコルの概要を説明します。一般に、これは、そのホーミングニーズ調査される細胞集団を分離する興味の染料でこの集団を染色し、レシピエント動物の血流中にこれらの細胞を注入する。レシピエント動物は、注射や関心の染料のための陽性の細胞のパーセンテージまたは絶対的な数について評価骨髄後所定の時間で屠殺される。最も一般的な実験的手法の一つでは、2つの遺伝的に異なる動物（野生型動物と対応するノックアウト）から造血細胞のホーミング効率が比較されます。この記事では、実験などの枠組みの中で造血細胞ホーミングプロトコルについて説明します。
Protocol
我々は実験で使用するセルを抽出することによりホーミング実験を始める。レシピエント動物の長い骨の隙間に全骨髄のホーミングなどC57BL/6J（WT）及びトランスジェニックいるかを確認することがWTの動物から抽出した骨髄細胞ごとに異なる場合は、この現在の実験のために我々が調べることも検討されてリゾホスファチジン受容体1（LPAR1）（KO）のためのノックアウト。 我々が実験を開始?…
Discussion
それによって幹細胞、前駆細胞と分化細胞を含む骨髄細胞、それらの方法は、骨髄へのホーミングには、血流や骨髄のマウスの骨髄腔に注入された後のプロセスです。定義から明らかなように、科学者は、造血幹細胞、前駆細胞または免疫表現型によって識別されると細胞選別によって単離された分化細胞のホーミングを勉強することを選んだことがあります。一般的に科学者は、系統マー?…
Acknowledgements
このプロトコルは、デビッドスカデンの研究室でテストされ最適化されていました。資金は、ダナファーバー癌研究所/マサチューセッツ総合病院臨床血液腫瘍フェローシッププログラムによって提供されます。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DPBS (Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline | Mediatech, Inc | 21-031-CV | ||
| Sterile Fetal Bovine Serum | Valley Biomedical, Inc | BS3033 | ||
| 0.5M EDTA (pH 8.0) | Boston BioProducts | BM-150 | ||
| Tryphan Blue solution | Mediatech, Inc | 25-900-CI | ||
| ACK Lysing Buffer | Lonza | 10-548E | ||
| Isopropranolol U.S.P. | Denison Pharmaceuticals, Inc | |||
| Vybrant DiD cell-labelling solution | Invitrogen | V22887 | ||
| Vybrant DiI cell-labelling solution | Invitrogen | V22885 |
References
- Adams, G. B., et al. Stem cell engraftment at the endosteal niche is specified by the calcium-sensing receptor. Nature. 439 (7076), 599-603 (2006).
- Broxmeyer, H. E. Chemokines in hematopoiesis. Curr Opin Hematol. 15 (1), 49-58 (2008).
Citer Cet Article
Yusuf, R. Z., Scadden, D. T. Homing of Hematopoietic Cells to the Bone Marrow. J. Vis. Exp. (25), e1104, doi:10.3791/1104 (2009).