Drosophila larven NMJ Immunohistochemie
Summary
Dit protocol wordt beschreven hoe u immunohistochemie uit te voeren op ontleed Drosophila larve.
Abstract
De<em> Drosophila</em> Neuromusculaire junctie (NMJ) is een gevestigd model dat wordt gebruikt voor de studie van synaptische plasticiteit en ontwikkeling. Het wijdverbreide gebruik van de<em> Drosophila</em> Motor systeem is te wijten aan de hoge toegankelijkheid. Het kan worden geanalyseerd met single-cell resolutie. Er zijn 30 spieren per hemisegment wiens afspraak binnen de perifere lichaam muur zijn bekend. Een totaal van 31 motorneuronen hechten aan deze spieren in een patroon dat high fidelity heeft. Met behulp van moleculaire biologie en genetica, kan men maken van transgene dieren of mutanten. Dan kan men de studie van de ontwikkeling gevolgen voor de morfologie en functie van de NMJ. Immunohistochemie kan worden gebruikt om duidelijk het imago van de componenten van de NMJ. In dit artikel hebben we laten zien hoe je antilichaam vlekken te gebruiken om het te visualiseren<em> Drosophila</em> Larvale NMJ.
Protocol
Discussion
Immunohistochemie (IHC) is van vitaal belang voor de studie van de NMJ biologie, omdat het in staat stelt visualisatie van de NMJ. Dit wordt bereikt door met behulp van antilichamen die de neuronale membraan (bijv. HRP), de presynapse (bijv., CSP, SYT), en / of de postsynapse (bijvoorbeeld DLG) te erkennen. Signaalmoleculen, structurele eiwitten, of nieuwe eiwitten van belang kunnen ook worden gekleurd. Dan kunnen genen worden gemuteerd of missexpressed, en IHC kan verstoring van synaptische structuur en / of neuronale …
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Stereomicroscope “Stemi” 2000 | Carl Zeiss MicroImaging Inc. | 495101-9804-000 | ||
| Light Source KL 1500 LCD | Carl Zeiss MicroImaging Inc. | 000000-1063-181 | ||
| Dumont SS Forceps | Fine Science Tools Inc. | 11200-33 | ||
| Dumont #5 Forceps | Fine Science Tools Inc. | 11252-20 | ||
| Adams™ Nutator Mixer | Becton, Dickinson and Company | 421105 | ||
| No.1 Precision knife | X-Acto | 3201 | ||
| No. 16 Blades | X-Acto | 216 | ||
| ProLong Gold Antifade reagent | Invitrogen Corporation | 36930 |
References
- Jan, L. Y., Jan, Y. N. Properties of the larval neuromuscular junction in Drosophila Melanogaster. J. Physiol. 262, 189-214 (1976).
- Johansen, J., Halpern, M. E., Johansen, K. M., Keshishian, H. Stereotypic morphology of glutamatergic synapses on identified muscle cells of Drosophila larvae. J Neurosci. 9, 710-725 (1989).
- Kesheshian, H., Broadie, K., Chiba, A., Bate, M. The Drosophila neuromuscular junction: a model system for studying synaptic development and function. Annu Rev Neurosci. 19, 545-575 (1996).
- Collins, C. A., DiAntonio, A. Synaptic development: insights from Drosophila. Curr Opin Neurobiol. 17 (1), 35-42 (2007).
