果蝇幼虫NMJ免疫
Summary
此协议表明如何执行解剖果蝇幼虫的免疫组织化学。
Abstract
“<em>果蝇</em神经肌肉接头（NMJ）是一个建立的模型系统，用于研究突触发展和可塑性。广泛使用<em>果蝇</em>电机系统由于其高的无障碍。它可以分析单细胞的分辨率。有30％hemisegment肌肉的已知其安排在外围的体壁。在高保真的模式，共有31个运动神经元连接到这些肌肉。利用分子生物学和遗传学，可以建立转基因动物或突变体。然后，可以研究的NMJ的形态和功能上的发展后果。免疫组织化学可以用来明确形象的NMJ组件。在这篇文章中，我们将演示如何使用抗体染色的可视化<em>果蝇</em>幼虫NMJ。
Protocol
在您开始之前准备了以下解决方案：PBT（0.1％海卫X100在1X PBS），PBTB（0.2％BSA在PBT），和PBTN（在PBTB 2％的农工商超市）。 解剖果蝇幼虫。请参阅果蝇幼虫NMJ夹层。 免疫组织化学移动到1.5 ml管中含有PBT的幼虫。幼虫洗净两次15分钟的PBT。注意：洗净，放在一个nutator混频器1.5 ml管。与pippetor取出的液体，并用新鲜的液体取代它。 <…
Discussion
免疫组织化学（IHC）NMJ生物学研究是至关重要的，因为它使可视化的NMJ。这是通过使用的抗体，承认神经细胞膜（如辣根过氧化物酶），突触前（例如，CSP，SYT），和/或postsynapse（例如，DLG）。信号分子，结构蛋白，或利益的新的蛋白质，也可以染色。然后，基因突变或missexpressed，和IHC检测突触的结构和/或神经信号的扰动。
果蝇 NMJ年初以来，照亮它的基本结构和功?…
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Stereomicroscope “Stemi” 2000 | Carl Zeiss MicroImaging Inc. | 495101-9804-000 | ||
| Light Source KL 1500 LCD | Carl Zeiss MicroImaging Inc. | 000000-1063-181 | ||
| Dumont SS Forceps | Fine Science Tools Inc. | 11200-33 | ||
| Dumont #5 Forceps | Fine Science Tools Inc. | 11252-20 | ||
| Adams™ Nutator Mixer | Becton, Dickinson and Company | 421105 | ||
| No.1 Precision knife | X-Acto | 3201 | ||
| No. 16 Blades | X-Acto | 216 | ||
| ProLong Gold Antifade reagent | Invitrogen Corporation | 36930 |
References
- Jan, L. Y., Jan, Y. N. Properties of the larval neuromuscular junction in Drosophila Melanogaster. J. Physiol. 262, 189-214 (1976).
- Johansen, J., Halpern, M. E., Johansen, K. M., Keshishian, H. Stereotypic morphology of glutamatergic synapses on identified muscle cells of Drosophila larvae. J Neurosci. 9, 710-725 (1989).
- Kesheshian, H., Broadie, K., Chiba, A., Bate, M. The Drosophila neuromuscular junction: a model system for studying synaptic development and function. Annu Rev Neurosci. 19, 545-575 (1996).
- Collins, C. A., DiAntonio, A. Synaptic development: insights from Drosophila. Curr Opin Neurobiol. 17 (1), 35-42 (2007).
Citer Cet Article
Brent, J., Werner, K., McCabe, B. D. Drosophila Larval NMJ Immunohistochemistry. J. Vis. Exp. (25), e1108, doi:10.3791/1108 (2009).