Ce protocole montre comment effectuer la larve de drosophile immunohistochimie sur disséqués.
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Article de méthode
Drosophile larvaire JNM immunohistochimie
Dans cet article
Résumé
Protocole
Avant de commencer
- Préparer les solutions suivantes: PBT (0,1% de Triton X100 dans du PBS 1X), PBTB (0,2% de BSA dans PBT), et PBTN (END 2% en PBTB).
- Disséquer larves de drosophile. S'il vous plaît voir la Drosophile larvaire JNM dissection.
L'immunohistochimie
- Déplacer les larves d'un tube de 1,5 ml contenant PBT. Laver les larves à deux reprises pendant 15 minutes dans du PBT. Remarque: pour se laver, placez le tube de 1,5 ml sur une table de mixage nutator. Retirer le liquide avec une pippetor et le remplacer avec du liquide frais.
- Retirez le PBT. Lav....
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Discussion
L'immunohistochimie (IHC) est vitale pour l'étude de la biologie JNM, car elle permet la visualisation de la JNM. Ceci est accompli en utilisant des anticorps qui reconnaissent la membrane neuronale (par exemple, HRP), l'presynapse (par exemple, CSP, SYT), et / ou le postsynapse (par exemple, DLG). Molécules de signalisation, des protéines de structure, ou de nouvelles protéines d'intérêt peuvent aussi être colorées. Ensuite, les gènes peuvent être mutés ou missexpressed, et IHC peut détecter une perturb.......
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Stéréomicroscope “Stemi” 2000 | Carl Zeiss, Inc. | 495101-9804-000 | |
| Source lumineuse KL 1500 LCD | Carl Zeiss, Inc. | 000000-1063-181 | |
| Pinces Dumont SS | Fine Science Tools | 11200-33 | |
| Pinces Dumont n°5 | Fine Science Tools | 11252-20 | |
| Agitateur rotatif Adams™ | BD Biosciences | 421105 | |
| Scalpel de précision n°1 | X-Acto | 3201 | |
| Lames n°16 | X-Acto | 216 | |
| Réactif antifade ProLong Gold | Invitrogen | 36930 |
Références
- Jan, L. Y., Jan, Y. N. Properties of the larval neuromuscular junction in Drosophila Melanogaster. J. Physiol. 262, 189-214 (1976).
- Johansen, J., Halpern, M. E., Johansen, K. M., Keshishian, H. Stereotypic morphology of glutamatergic synapses on ident....
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Réimpressions et autorisations
