एक सरल विधि प्रदान की जाती है कि तेजी से और छोटे ऊतकों के नमूनों से कई संयंत्र हार्मोन की निकासी विश्लेषण के लिए अनुमति देता है. इस प्रक्रिया पवित्र शुद्धि कदम के रूप में भाप चरण निकासी का उपयोग करता है. नमूने जीसी / रासायनिक ionization है कि मुख्य रूप से उत्पादन (1 एम) के साथ एमएस + आयनों द्वारा विश्लेषण कर रहे हैं.
Abstract
संयंत्र हार्मोन और संबंधित संकेत यौगिकों संयंत्र प्रतिक्रियाओं के विभिन्न पर्यावरण उत्तेजनाओं और तनाव के नियमन में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं. सबसे गंभीर तनाव में कीट herbivory, रोगज़नक़ संक्रमण, सूखे और तनाव हैं. के लिए इनमें से प्रत्येक के हार्मोन का एक विशिष्ट सेट और / या संयोजन उसके ठीक धुन प्रतिक्रियाओं करने के लिए जाना जाता है, जिससे संयंत्र के अस्तित्व को सुनिश्चित करने पर जोर दिया. इन प्रतिक्रियाओं के विनियमन में शामिल प्रमुख हार्मोन jasmonic (जावेद) एसिड, चिरायता एसिड (एसए), और abscisic एसिड (ए.बी.ए.) कर रहे हैं. बेहतर व्यक्ति के रूप में के रूप में अच्छी तरह से इन प्रतिक्रियाओं यह आवश्यक है के दौरान उनके संभावित बातचीत हार्मोन की भूमिका को समझने के लिए एक अस्थायी के रूप में के रूप में अच्छी तरह से एक स्थानिक फैशन में उनकी बहुतायत में परिवर्तन की निगरानी करने के लिए. इन और अन्य संकेत यौगिकों के आसान है, संवेदनशील है, और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य मात्रा का ठहराव के लिए हम एक भाप चरण निष्कर्षण और गैस क्रोमैटोग्राफी / मास स्पेक्ट्रोमेट्री (जीसी / एमएस) विश्लेषण (1, 2, 3, 4) के आधार पर विधि विकसित की है. प्लान्ट टिशू से अम्लीय जलीय द्वारा इन यौगिकों निकालने के बाद 1-propanol dichloromethane के साथ मिश्रित कार्बोक्जिलिक – एसिड युक्त यौगिकों methylated गर्मी के तहत volatilized, और एक polymeric शोषक पर एकत्र. एक नमूना शीशी में elution के बाद analytes गैस क्रोमैटोग्राफी द्वारा अलग कर रहे हैं और रासायनिक ionization मास स्पेक्ट्रोमेट्री द्वारा पता लगाया है. उपयुक्त आंतरिक मानकों का उपयोग करें तो analyte और आंतरिक मानक के शिखर क्षेत्रों से संबंधित द्वारा सरल मात्रा का ठहराव के लिए अनुमति देता है.
Protocol
पहले हम निकासी के लिए 2ml पेंच टोपी शीशियों को तैयार करने की जरूरत है: 400ul निष्कर्षण बफर जोड़ें (एक propanol: H2O: केंद्रित एचसीएल 2:1:0.002 खंड / / खंड खंड) और संबंधित आंतरिक मानक के 10 μl (10ng/μl ) एक शीशी. तरल नाइट्रोजन में फ्रीज और तब च?…
Discussion
विधि यहाँ प्रस्तुत संयंत्र संकेत प्रदान की है कि परिसर के आकार और रासायनिक प्रकृति जा रहा निकाले, methylated, और vaporized से नहीं रोकता यौगिकों की एक विस्तृत सरणी के लिए मज़बूती से काम करने के लिए सिद्ध किया गया है. …