剖析酿酒酵母 ASCI

Summary

酵母细胞减数分裂的遗传分析，或选择二倍体受精卵显微操作是需要。这些micromanipulations都是开展使用了解剖镜下微针。微针是用于搬迁细胞的，由显微不同程度的自动化控制。

Abstract

酵母是一种非常听话的模型系统，用于研究许多不同的细胞过程。常见的实验室应变<em>酿酒酵母</em单倍体或二倍体状态存在。能够结合两个单倍体的等位基因和能力引入到基因组的修改要求ASCI生产和清扫。 ASCI单倍体细胞开始生产与兼容的交配型酵母单倍体菌株产生二倍体菌株交配。这可以是固体或液体介质的方式来完成。这是有利的，选择的媒介，选择性促进其生长的单倍体菌株相比，二倍体。然后让贫营养培养基中的孢子，形成子囊，捆绑四个单倍体的女儿从减数分裂繁殖的二倍体细胞的二倍体。植物细胞和ASCI的混合物，然后处理与酶zymolyase消化掉膜囊周围ASCI子囊。使用显微操作与微针下解剖镜下可以拿起个人ASCI和分离和重新定位的四个ascopores。解剖ASCI长大了好几天，和到适当的选择性培养基的标记或等位基因副本电镀兴趣测试。

Protocol

建设二倍体菌株通过交配生产二倍体议定书“ 最初的菌株，应取得YPD，或选择性培养基上，如果必要，产生单菌落。两个单倍体菌株应相反交配型（即MATA和MATα）。 使用无菌接种环挑一个殖民地的一小部分，从两个单倍体菌株之一。在一个新的YPD板连胜循环一次，在整个板块的直线。标记板底部的箭头方向连胜。 重复上相同的YPD板第二应变。这一次连胜垂直殖民地的第…

Discussion

酵母夹层是一个有用的工具，选择所需的标记新菌株。当确定四个子囊孢子的理论增长模式，重要的是看的营养细胞的基因型。如果一个质粒是存在的，人们必须知道，如果它是单一的，高或低复制，因为这会影响子囊孢子（S）接收的质粒，并会影响预测和结论，就被操纵的菌株。

某些菌株可以比别人在很短的时间内生产的许多子囊孢子的更好。其他菌株可能产生的子囊孢?…

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
Singer MSM System 200	Microscope	Singer Instruments	NA
D-sorbitol	Reagent	BioShop	SOR508
Tris	Reagent	BioShop	TRS001
Zymolyase 100T	Reagent	Seikagaku Corporation	120493
Yeast extract	Reagent	BioShop	YEX401
Peptone	Reagent	BioShop	PEP 403
D-glucose	Reagent	BioShop	GLU501
Yeast nitrogen base	Reagent	BioShop	YNB406
Bio-tryptone	Reagent	BioShop	TRP402
Sodium chloride	Reagent	BioShop	SOD002
Potassium acetate	Reagent	BioShop	POA 301
Agar	Reagent	BioShop	AGR003
Adenine sulfate	Reagent	BioShop	ADS201
L-uracil	Reagent	BioShop	URA 241
L-tryptophan	Reagent	BioShop	TRP 100
L-histidine	Reagent	BioShop	HIS 200
L-arginine	Reagent	Amresco	0877-100G
L-methionine	Reagent	BioShop	MET 222
L-tyrosine	Reagent	BioShop	TYR 333
L-isoleucine	Reagent	BioShop	ISO 910
L-valine	Reagent	BioShop	VAL 201
L-lysine	Reagent	BioShop	LYS 101
L-phenylalanine	Reagent	BioShop	PHA 302
L-glutamic acid	Reagent	BioShop	GLU 202
L-threonine	Reagent	BioShop	THR002
L-leucine	Reagent	BioShop	LEU 222