Messung Caenorhabditis elegans Life Span auf festen Medien
Summary
In diesem Artikel präsentieren wir ein allgemeines Protokoll zur Messung der Lebensdauer von Nematoden auf festen Medien mit UV-getötet bakterielle Lebensmittel erhalten.
Abstract
Altern ist ein degenerativer Prozess durch eine progressive Verschlechterung der zellulären Bestandteile und Organellen aufgrund der Mortalität gekennzeichnet. Der Fadenwurm<em> Caenorhabditis elegans</em> Hat als Haupt-Modell verwendet, um die Biologie des Alterns Studie hervor. Da nahezu alle biologischen Subsystem erfährt funktionelle Rückgang mit zunehmendem Alter, das Leben ist span den primären Endpunkt von Interesse, wenn man Gesamtrate des Alterns. In Nematoden, ist Lebensdauer in der Regel als die Anzahl der Tage ein Tier reagiert weiterhin auf äußere Reize definiert. Nematoden können entweder propagierten in flüssigen Medien oder auf festen Medien in Platten, und Techniken zur Messung der Lebensdauer unter beiden Bedingungen entwickelt worden. Hier präsentieren wir eine allgemeine Verfahren zur Messung der Lebensdauer von Nematoden auf einem soliden Wachstum Nematoden Medien gepflegt und gefüttert eine Diät von UV-abgetöteten Bakterien. Diese Verfahren können leicht Assay Lebensdauer unter verschiedenen üblichen Bedingungen angepasst werden, einschließlich einer Diät, die aus lebenden Bakterien, diätetische Einschränkung und RNA-Interferenz.
Protocol
Discussion
Die genetische Kontrolle der Langlebigkeit wurde ausgiebig in C. studierte elegans, vor allem wegen der Leichtigkeit und Schnelligkeit, mit der Lebensdauer bestimmt werden kann. Das Protokoll in diesem Artikel beschrieben wird ein Grundgerüst für den Erhalt von reproduzierbaren Lebensdauer von Daten in C. elegans und kann auch auf relatednematode Arten angewendet werden. 2 Durch ein paar einfache Änderungen dieser Verfahren angepasst Lebensdauer unter verschiedenen Bedingungen ge…
Acknowledgements
Diese Arbeit wurde durch ein Glenn / AFAR Durchbrüche in der Gerontologie Award und NIH Grant 1R01AG031108-01 bis MKGS wird durch NIH Ausbildungsförderung P30AG013280 unterstützt werden. MK ist eine Ellison Medical Foundation New Scholar in Aging.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Agar | Reagent | Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems) | DF0145-17-0 (214530) | |
| Ampicillin | Reagent | MidSci | 0339 | |
| BactoTryptone | Reagent | Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems) | DF0123-17-3 (211705) | |
| BactoPeptone | Reagent | Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems) | DF0118-17-0 (211677) | |
| CaCl2 | Reagent | Fisher Scientific (JT Baker) | NC9699248 (1332-01) | |
| Carbenicillin | Reagent | Gold BioTechnology (GBT) | C0109 | |
| Cholesterol | Reagent | Sigma-Aldrich | C75209 | |
| Fluorodeoxyuridine (FUDR) | Reagent | Sigma-Aldrich | F0503 | |
| Isopropyl β-d-Thiogalactopyranoside (IPTG) | Reagent | Gold BioTechnology (GBT) | I2481C5 | |
| KPi Dibasic | Reagent | Fisher Scientific (JT Baker) | 5087862 (3252-01) | |
| KPi Monobasic | Reagent | Fisher Scientific (JT Baker) | 5087861 (3246-01) | |
| MgSO4 | Reagent | Fisher Scientific (JT Baker) | NC9561800 (2500-01) | |
| NaCl | Reagent | Fisher Scientific | S251 | |
| Tris | Reagent | Sigma-Aldrich | T1503 | |
| Yeast Extract | Reagent | Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems) | DF0886-17-0 (288620) |
References
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