Misura Caenorhabditis elegans Life Span su terreni solidi
Summary
In questo articolo vi presentiamo un protocollo generale per la misurazione della durata di nematodi mantenuto su un supporto solido con UV ucciso cibo batterica.
Abstract
L'invecchiamento è un processo degenerativo caratterizzato da un progressivo deterioramento delle componenti cellulari e gli organelli con conseguente mortalità. Il nematode<em> Caenorhabditis elegans</em> È emerso come principale modello utilizzato per studiare la biologia dell'invecchiamento. Perché praticamente ogni sottosistema biologica subisce declino funzionale con l'aumentare dell'età, la durata della vita è l'obiettivo primario di interesse se si considera tasso totale di invecchiamento. Nei nematodi, la durata è tipicamente definito come il numero dei giorni di un animale rimane sensibile agli stimoli esterni. Nematodi possono essere propagati sia in mezzi liquidi o su un supporto solido in lastre, e sono state sviluppate tecniche per la misurazione della durata della vita in entrambe le condizioni. Qui vi presentiamo un protocollo generalizzato per la misurazione della durata di nematodi mantenuta su terreni solidi crescita nematodi e nutriti con una dieta a base di raggi UV-batteri uccisi. Queste procedure possono essere facilmente adattato alle durata del test vita sotto varie condizioni comuni, tra cui una dieta composta di batteri vivi, restrizione dietetica, e l'interferenza dell'RNA.
Protocol
Discussion
Il controllo genetico della longevità è stato studiato estensivamente in C. elegans, in gran parte dovuto alla facilità e rapidità con cui durata può essere determinata. Il protocollo descritto in questo articolo descrive un quadro di base per ottenere dati riproducibili durata della vita in C. elegans e può essere applicato anche alle specie relatednematode 2. Facendo alcune modifiche semplici queste procedure possono essere adattati per misurare la durata della vita sotto una variet?…
Acknowledgements
Questo lavoro è stato supportato da una Glenn / AFAR scoperte nel Premio Gerontologia e NIH di Grant 1R01AG031108-01 a MKGS è supportato dal NIH formazione concedere P30AG013280. MK è una Ellison Medical Foundation Scholar Nuove invecchiamento.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Agar | Reagent | Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems) | DF0145-17-0 (214530) | |
| Ampicillin | Reagent | MidSci | 0339 | |
| BactoTryptone | Reagent | Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems) | DF0123-17-3 (211705) | |
| BactoPeptone | Reagent | Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems) | DF0118-17-0 (211677) | |
| CaCl2 | Reagent | Fisher Scientific (JT Baker) | NC9699248 (1332-01) | |
| Carbenicillin | Reagent | Gold BioTechnology (GBT) | C0109 | |
| Cholesterol | Reagent | Sigma-Aldrich | C75209 | |
| Fluorodeoxyuridine (FUDR) | Reagent | Sigma-Aldrich | F0503 | |
| Isopropyl β-d-Thiogalactopyranoside (IPTG) | Reagent | Gold BioTechnology (GBT) | I2481C5 | |
| KPi Dibasic | Reagent | Fisher Scientific (JT Baker) | 5087862 (3252-01) | |
| KPi Monobasic | Reagent | Fisher Scientific (JT Baker) | 5087861 (3246-01) | |
| MgSO4 | Reagent | Fisher Scientific (JT Baker) | NC9561800 (2500-01) | |
| NaCl | Reagent | Fisher Scientific | S251 | |
| Tris | Reagent | Sigma-Aldrich | T1503 | |
| Yeast Extract | Reagent | Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems) | DF0886-17-0 (288620) |
References
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