Ölçme Caenorhabditis elegans Katı Medya Ömrü
Summary
Bu yazıda, UV öldürüldü bakteriyel gıda ile sağlam bir medya üzerinde muhafaza nematod ömrü ölçmek için genel bir protokol mevcut.
Abstract
Yaşlanma, hücresel bileşenleri ve ölüm ile sonuçlanan organelleri ilerleyici bir bozulma ile karakterize dejeneratif bir süreç. Nematod<em> Caenorhabditis elegans</em> Yaşlanma biyolojisi okumak için kullanılan bir ana model olarak ortaya çıkmıştır. Hemen hemen her biyolojik alt sistemi, artan yaş ile fonksiyonel düşüş uğrar Çünkü yaşlanma toplam oranı göz önüne alındığında, ömrü ilgi birincil son nokta. Nematod, ömrü genellikle bir hayvan dış uyaranlara yanıt kalır gün sayısı olarak tanımlanır. Nematodlar ya da sıvı ortamda veya plakalar katı ortam üzerinde yayılır olabilir ve her şartlar altında ömrü ölçüm teknikleri geliştirilmiştir. Burada katı nematod büyüme ortamı devam nematod ömrü ölçmek için genelleştirilmiş bir protokol mevcut ve UV-öldürülmüş bakteri bir diyetle beslenen. Bu prosedürler kolayca canlı bakteri, diyet kısıtlaması, ve RNA girişim oluşan bir diyet de dahil olmak üzere, çeşitli ortak koşullar altında tahlil ömrü adapte olabilir.
Protocol
Discussion
Uzun ömürlü genetik kontrol C. yaygın olarak incelenmiştir elegans, büyük ölçüde ömrü tespit edilebilir olan kolaylığı ve hızı nedeniyle. Bu makalede açıklanan protokol C. tekrarlanabilir ömrü veri elde etmek için temel bir çerçeve tanımlar elegans ve relatednematode türler için de uygulanabilir. 2, bu işlemler çok çeşitli şartlar altında ömrü ölçmek için adapte edilebilir basit bazı değişiklikler yaparak . Burada RNA enterferans (RN…
Acknowledgements
Bu çalışma Gerontoloji Ödülü ve NIH Hibe MKGS 1R01AG031108-01, Ulusal Sağlık Enstitüsü, eğitim hibe P30AG013280 tarafından desteklenen bir Glenn / Afar buluşlar tarafından desteklenmiştir. MK Yaşlanma Ellison Tıp Vakfı Yeni Scholar.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Agar | Reagent | Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems) | DF0145-17-0 (214530) | |
| Ampicillin | Reagent | MidSci | 0339 | |
| BactoTryptone | Reagent | Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems) | DF0123-17-3 (211705) | |
| BactoPeptone | Reagent | Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems) | DF0118-17-0 (211677) | |
| CaCl2 | Reagent | Fisher Scientific (JT Baker) | NC9699248 (1332-01) | |
| Carbenicillin | Reagent | Gold BioTechnology (GBT) | C0109 | |
| Cholesterol | Reagent | Sigma-Aldrich | C75209 | |
| Fluorodeoxyuridine (FUDR) | Reagent | Sigma-Aldrich | F0503 | |
| Isopropyl β-d-Thiogalactopyranoside (IPTG) | Reagent | Gold BioTechnology (GBT) | I2481C5 | |
| KPi Dibasic | Reagent | Fisher Scientific (JT Baker) | 5087862 (3252-01) | |
| KPi Monobasic | Reagent | Fisher Scientific (JT Baker) | 5087861 (3246-01) | |
| MgSO4 | Reagent | Fisher Scientific (JT Baker) | NC9561800 (2500-01) | |
| NaCl | Reagent | Fisher Scientific | S251 | |
| Tris | Reagent | Sigma-Aldrich | T1503 | |
| Yeast Extract | Reagent | Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems) | DF0886-17-0 (288620) |
References
- Wood, W. B., Wood, W. B. . The Nematode Caenorhabditis elegans. , 1-16 (1988).
- Sutphin, G. L., Kaeberlein, M. Dietary restriction by bacterial deprivation increases life span in wild-derived nematodes. Exp Gerontol. 43, 130-135 (2008).
- Garigan, D. Genetic analysis of tissue aging in Caenorhabditis elegans: a role for heat-shock factor and bacterial proliferation. Génétique. 161, 1101-1112 (2002).
- Chen, D., Pan, K. Z., Palter, J. E., Kapahi, P. Longevity determined by developmental arrest genes in Caenorhabditis elegans. Aging Cell. 6, 525-523 (2007).
- Curran, S. P., Ruvkun, G. Lifespan regulation by evolutionarily conserved genes essential for viability. PLoS Genet. 3, e56-e56 (2007).
- Dillin, A. Rates of behavior and aging specified by mitochondrial function during development. Science. 298, 2398-2401 (2002).
- Hamilton, B. A systematic RNAi screen for longevity genes in C. elegans. Genes Dev. 19, 1544-1555 (2005).
- Hansen, M., Hsu, A. L., Dillin, A., Kenyon, C. New genes tied to endocrine, metabolic, and dietary regulation of lifespan from a Caenorhabditis elegans genomic RNAi screen. PLoS Genet. 1, 119-128 (2005).
- Lee, S. S. A systematic RNAi screen identifies a critical role for mitochondria in C. elegans longevity. Nat Genet. 33, 40-48 (2003).
- Smith, E. D. Age- and calorie-independent life span extension from dietary restriction by bacterial deprivation in Caenorhabditis elegans. BMC Dev Biol. 8, 49-49 (2008).
- Hodgkin, J., Horvitz, H. R., Brenner, S. Nondisjunction Mutants of the Nematode CAENORHABDITIS ELEGANS. Génétique. 91, 67-94 (1979).
- Emmons, S. W., Sternberg, P. W., Riddle, D. L., Blumenthal, T., Meyer, B. J., Priess, J. R. . C. ELEGANS II. , (1997).
- Lipton, J., Kleemann, G., Ghosh, R., Lints, R., Emmons, S. W. Mate searching in Caenorhabditis elegans: a genetic model for sex drive in a simple invertebrate. J Neurosci. 24, 7427-7434 (2004).
- Davis, B. O., Anderson, G. L., Dusenbery, D. B. Total luminescence spectroscopy of fluorescence changes during aging in Caenorhabditis elegans. Biochimie. 21, 4089-4095 (1982).
- Klass, M. R. Aging in the nematode Caenorhabditis elegans: major biological and environmental factors influencing life span. Mech Ageing Dev. 6, 413-429 (1977).
- Steinkraus, K. A. Dietary restriction suppresses proteotoxicity and enhances longevity by an hsf-1-dependent mechanism in Caenorhabditis elegans. Aging Cell. 7, 394-404 (2008).
