Imágenes en directo de la migración de células gliales en el ojo del disco imaginal de Drosophila
Summary
A continuación se describe un protocolo para examinar la migración de las células gliales en el desarrollo del ojo de Drosophila mediante el análisis microscópico directo emparejado con GFP etiquetados células gliales.
Abstract
Las células gliales de vertebrados e invertebrados organismos deben emigrar a las regiones de destino final para ensheath y apoyar las neuronas asociadas. Si bien el progreso reciente ha sido hecho para describir la migración en vivo de las células gliales en el ala en desarrollo pupal (1), los estudios de<em> Drosophila</em> La migración de células gliales que suelen participar el examen de tejido fijado. Análisis en vivo microscópico de las células móviles ofrece la posibilidad de examinar el comportamiento celular en todo el proceso migratorio, incluyendo la determinación de la tasa y los cambios de dirección del crecimiento. Junto con el uso de herramientas genéticas, imágenes en vivo se puede utilizar para determinar las funciones más precisa de genes específicos en el proceso de desarrollo. El trabajo previo de Silies<em> Et al.</em> (2) ha descrito la migración de las células de origen en el tallo óptico, una estructura que conecta el ojo y el cerebro en desarrollo, en el disco imaginal del ojo en el tejido fijado. Aquí planteamos un protocolo para el examen de la migración en vivo de las células gliales en el<em> Drosophila</em> Disco imaginal del ojo. Nos aprovechamos de una línea de Drosophila que expresa GFP en las células de desarrollo para seguir la progresión de las células gliales de tipo salvaje y en los animales mutantes.
Protocol
Discussion
En este protocolo se describe la observación de la migración de células gliales en el disco imaginal del ojo mediante microscopía en vivo. En nuestro ejemplo, de tipo salvaje (figura 1 AD), se utilizó un marcador GFP nuclear para observar el movimiento de células gliales en el disco de los ojos en el transcurso de una hora. En un mutante de un gen candidato requerido para la migración de células gliales en la actualidad objeto de estudio en nuestro laboratorio, hemos observado un estancamiento de los n?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Patrick Cafferty es apoyado por una beca postdoctoral de la Sociedad de Esclerosis Múltiple de Canadá.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Poly-L-lysine | Reagent | Sigma | P8920 | |
| Schneider’s Insect Media | Reagent | Sigma | S0146 | |
| Penicillin-Streptomycin | Reagent | Sigma | P4458 | |
| Insulin solution from bovine pancreas | Reagent | Sigma | I0516 | |
| Chamlide Magnetic chamber | Tool | Live cell Instrument | CM-R-10 | 35 mm dish type chamber for 18 mm coverslip |
| Ultra fine clipper scissors | Tool | Fine scientific tools | 15200-00 | |
| Dumont #5 forceps | Tool | Fine scientific tools | 11251-20 | |
| Fluorescent microscope | Microscope | Zeiss | Any fluorescent imaging system that has the necessary filters and excitation for GFP can be used. |
References
- Aigouy, B., Lepelletier, L., Giangrande, A. Glial chain migration requires pioneer cells. J. Neurosci. 28, 11635-11641 (2008).
- Silies, M., Yuva, Y., Engelen, D., Aho, A., Stork, T., Klambt, C. Glial cell migration in the eye disc. J. Neurosci. 27, 13130-13139 (2007).
- Brand, A. H., Perrimon, N. Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes. Development. 118, 401-415 (1993).
- Sepp, K. J., Auld, V. J. Conversion of lacZ enhancer trap lines to GAL4 lines using targeted transposition in Drosophila melanogaster. Génétique. 151, 1093-1101 (1999).
- Gibson, M. C., Patel, A. B., Nagpal, R., Perrimon, N. The emergence of geometric order in proliferating metazoan epitheia. Nature. 442, 1038-1041 (2006).
- Lee, T., Luo, L. Mosaic analysis with a repressible cell marker (MARCM) for Drosophila neural development. Trends Neurosci. 24, 251-254 (2001).
