आयु कक्ष के परिणाम के द्वारा खमीर कालानुक्रमिक लाइफ स्पैन बढ़ाता
Summary
खमीर में कालानुक्रमिक उम्र बढ़ने स्थिर चरण में समय के साथ जुड़े सेल व्यवहार्यता की हानि करने के लिए संदर्भित करता है. यहाँ हम मात्रात्मक खमीर कालानुक्रमिक जीवन अवधि का निर्धारण करने के लिए एक उच्च throughput विधि का वर्णन.
Abstract
नवोदित खमीर<em> Saccharomyces cerevisiae</em> उम्र बढ़ने अनुसंधान के क्षेत्र में एक महत्वपूर्ण मॉडल जीव साबित हो गया है<sup> 1</sup>. replicative और कालानुक्रमिक जीवन spans दो स्थापित करने के लिए खमीर में उम्र बढ़ने अध्ययन के लिए इस्तेमाल किया मानदंड हैं. Replicative बुढ़ापे बेटी कोशिकाओं की संख्या एक एकल खमीर माँ सेल senescence पहले उत्पादन के रूप में परिभाषित किया गया है, कालानुक्रमिक उम्र बढ़ने समय कक्षों की लंबाई के द्वारा परिभाषित किया गया है एक गैर विभाजित राज्य निष्क्रियता की तरह, में जीवित रह सकते हैं<sup2></sup>. हम कालानुक्रमिक जीवन काल के मात्रात्मक माप के लिए एक उच्च throughput विधि विकसित किया है. इस विधि आंदोलन के तहत एक परिभाषित मध्यम और लगातार तापमान पर कोशिकाओं की उम्र बढ़ने शामिल है. प्रत्येक उम्र बिंदु पर, कक्षों की एक उप जनसंख्या उम्र बढ़ने की संस्कृति से निकाल दिया जाता है और अमीर मध्यम विकास में inoculated. एक संकल्प उच्च विकास की अवस्था तो आयु वर्ग के एक Bioscreen सी MBR मशीन का उपयोग कोशिकाओं के इस उप जनसंख्या के लिए प्राप्त की है. एक एल्गोरिथ्म तो व्यवहार्य कोशिकाओं के रिश्तेदार अनुपात प्रत्येक उप – आबादी में प्रत्येक आयु बिंदु पर विकास कैनेटीक्स के आधार पर निर्धारित करने के लिए लागू किया जाता है. यह विधि काफी कम समय और अन्य कालानुक्रमिक उम्र assays की तुलना में, जबकि reproducibility और सटीक बनाए रखने संसाधनों की आवश्यकता है. इस परख की प्रकृति उच्च throughput बड़े पैमाने पर आनुवंशिक और रासायनिक स्क्रीन के लिए अनुमति देने के लिए और अधिक जटिल जीवों में आगे के परीक्षण के के लिए उपन्यास दीर्घायु संशोधक की पहचान करनी चाहिए.
Protocol
Discussion
कालानुक्रमिक उच्च throughput जीवन काल परख यहाँ वर्णित उच्च सटीकता और परिशुद्धता के साथ उपभेदों की बड़ी संख्या की उम्र बढ़ने की क्षमता बढ़ाता के लिए एक कारगर तरीका है. शास्त्रीय तरीकों पर इस विधि का प्राथमिक …
Acknowledgements
यह काम एनआईएच 1R21AG031965 01A1 अनुदान द्वारा समर्थित किया गया. एम के एक एलिसन एजिंग में मेडिकल फाउंडेशन नई विद्वान है.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Bacto Peptone | Reagent | BD | 211677 | |
| Bacto Yeast Extract | Reagent | BD | 288620 | |
| Difco Agar | Reagent | BD | 214530 | |
| Yeast Nitrogen Base w/o A.A. and A.S. | Reagent | MidSci | J630-500G | |
| Amino Acids | Reagent | Sigma | ||
| Ammonium Sulfate | Reagent | Spectrum | AM185 | |
| Dextrose | Reagent | Fisher | D16-10 | |
| Bioscreen C MBR machine | Tool | Growth Curves USA | 5101370 | |
| Bioscreen 100-well Honeycomb plate | Tool | Growth Curves USA | 9502550 |
References
- Steinkraus, K. A., Kaeberlein, M., Kennedy, B. K. Replicative aging in yeast: the means to the end. Annu Rev Cell Dev Biol. 24, 29 (2008).
- Kaeberlein, M., Conn, P. M. . Handbook of models for human aging. , 109 (2006).
- Fabrizio, P., Longo, V. D. The chronological life span of Saccharomyces cerevisiae. Aging Cell. 2 (2), 73 (2003).
- Murakami, C. J., Burtner, C. R., Kennedy, B. K., Kaeberlein, M. A method for high-throughput quantitative analysis of yeast chronological life span. J Gerontol A Biol Sci Med Sci. 63 (2), 113 (2008).
- Piper, P. W., Harris, N. L., MacLean, M. Preadaptation to efficient respiratory maintenance is essential both for maximal longevity and the retention of replicative potential in chronologically ageing yeast. Mech Ageing Dev. 127 (9), 733 (2006).
- Fabrizio, P., et al. Superoxide is a mediator of an altruistic aging program in Saccharomyces cerevisiae. J Cell Biol. 166 (7), 1055 (2004).
