Kvantifiering Jäst Span Kronologisk Life av utväxt av Aged celler
Summary
Kronologiska åldrande i jäst avser förlust av cellernas livskraft i samband med tiden i stationär fas. Här beskriver vi en hög genomströmning metod för att kvantitativt bestämma jäst kronologisk livslängd.
Abstract
Den spirande jäst<em> Saccharomyces cerevisiae</em> Har visat sig vara en viktig organism i forskningen inom området för forskning om äldre<sup> 1</sup>. Den replikationsförmåga och kronologisk spänner liv är två etablerade paradigm för att studera åldrande i jäst. Replikationsförmåga åldrande definieras som antalet dottercellerna en enda jäst modercellen producerar innan åldrande, kronologiska åldrande definieras av den tid som celler kan överleva i en icke-dela, inaktivitet-liknande tillstånd<sup> 2</sup>. Vi har utvecklat en hög genomströmning metod för kvantitativ mätning av kronologisk livslängd. Denna metod innebär åldrande celler i ett definierat medium i agitation och vid konstant temperatur. Vid varje ålders-punkt, är en undergrupp av celler avlägsnas från den åldrande kultur och inokuleras i rika tillväxt medium. En högupplöst tillväxtkurvan då erhålls för denna delpopulation av gamla celler med en Bioscreen C MBR maskin. En algoritm tillämpas sedan för att bestämma den relativa andelen livskraftiga celler i varje delpopulation baserat på tillväxten kinetiken vid varje ålders-punkt. Metoden kräver betydligt mindre tid och resurser jämfört med andra kronologisk livslängd analyser bibehållen reproducerbarhet och precision. Den höga genomströmning natur denna analys bör tillåta storskaliga genetiska och kemiska skärmar för att identifiera nya livslängd modifierare för ytterligare tester i mer komplexa organismer.
Protocol
Discussion
Den höga genomströmning kronologisk livslängd analys som beskrivs här är en effektiv metod för att kvantifiera den åldrande potentialen av ett stort antal stammar med hög noggrannhet och precision. Den primära god tid före denna metod under klassiska metoder för att bestämma överlevnad genom att räkna kolonibildande enheter (se t.ex. 3) är att använda en shaker / inkubator / platta behandlingen enhet som Bioscreen C MBR maskin för att få högupplösta tillväxtkurvor på varje ålder-punkt. …
Acknowledgements
Detta arbete stöddes av NIH Grant 1R21AG031965-01A1. MK är en Ellison Medical Foundation Nya Scholar i åldrande.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Bacto Peptone | Reagent | BD | 211677 | |
| Bacto Yeast Extract | Reagent | BD | 288620 | |
| Difco Agar | Reagent | BD | 214530 | |
| Yeast Nitrogen Base w/o A.A. and A.S. | Reagent | MidSci | J630-500G | |
| Amino Acids | Reagent | Sigma | ||
| Ammonium Sulfate | Reagent | Spectrum | AM185 | |
| Dextrose | Reagent | Fisher | D16-10 | |
| Bioscreen C MBR machine | Tool | Growth Curves USA | 5101370 | |
| Bioscreen 100-well Honeycomb plate | Tool | Growth Curves USA | 9502550 |
References
- Steinkraus, K. A., Kaeberlein, M., Kennedy, B. K. Replicative aging in yeast: the means to the end. Annu Rev Cell Dev Biol. 24, 29 (2008).
- Kaeberlein, M., Conn, P. M. . Handbook of models for human aging. , 109 (2006).
- Fabrizio, P., Longo, V. D. The chronological life span of Saccharomyces cerevisiae. Aging Cell. 2 (2), 73 (2003).
- Murakami, C. J., Burtner, C. R., Kennedy, B. K., Kaeberlein, M. A method for high-throughput quantitative analysis of yeast chronological life span. J Gerontol A Biol Sci Med Sci. 63 (2), 113 (2008).
- Piper, P. W., Harris, N. L., MacLean, M. Preadaptation to efficient respiratory maintenance is essential both for maximal longevity and the retention of replicative potential in chronologically ageing yeast. Mech Ageing Dev. 127 (9), 733 (2006).
- Fabrizio, P., et al. Superoxide is a mediator of an altruistic aging program in Saccharomyces cerevisiae. J Cell Biol. 166 (7), 1055 (2004).
