चेचक संक्रमण और कोशिकाओं मेजबान और वायरल जीन की अभिव्यक्ति के HeLa के विश्लेषण के लिए प्रोटोकॉल. 3 के भाग 1.
Abstract
परिवार<em> Poxviridae</em> बड़े डबल असहाय डीएनए वायरस है कि संक्रमित कोशिकाओं के cytoplasm में विशेष रूप से को दोहराने वाले होते हैं. के सदस्य<em> Orthopox</em> जीनस शामिल शीतला, मानव चेचक की प्रेरणा का एजेंट, monkeypox, और चेचक (VAC), वायरस परिवार के prototypic सदस्य. अपेक्षाकृत बड़े (~ 200 केबी) चेचक जीनोम के भीतर जीनों के तीन वर्गों में इनकोड किया गया है: जल्दी, मध्यवर्ती, और देर. जबकि सभी तीन वर्गों virally इनकोडिंग शाही सेना पोलिमेरासिज़ द्वारा लिखित हैं, प्रत्येक वर्ग वायरस के जीवन चक्र में एक अलग समारोह में कार्य करता है. Poxviruses संक्रमण के दौरान मेजबान सेलुलर पर्यावरण के मॉडुलन के लिए कई रणनीतियों का उपयोग. आदेश में समझने के लिए दोनों मेजबान और वायरस के जीन अभिव्यक्ति के विनियमन के लिए, हम जीनोम चौड़ा दृष्टिकोण का उपयोग किया है दोनों वायरस और मेजबान कोशिकाओं से प्रतिलेख बहुतायत का विश्लेषण. यहाँ, हम समय चेचक वायरस और नमूने शाही सेना के साथ कई बार के बाद संक्रमण बिंदुओं पर HELA कोशिकाओं के पाठ्यक्रम संक्रमण प्रदर्शित करता है. दोनों मेजबान और वायरल कुल शाही सेना और अलग है और जीन अभिव्यक्ति के विश्लेषण के लिए प्रोटीन के संकरण के लिए प्रवर्धित.
Protocol
भाग 1: संक्रमण की स्थापना बोतल में HELA कोशिकाओं बढ़ो और इंतजार जब तक कोशिकाओं मिला हुआ लगभग 80% हैं. 2% FBS के साथ नियमित रूप से DMEM और नहीं जोड़ा एंटीबायोटिक दवाओं: प्रयोग के लिए पर्याप्त वायरल मध्यम विका?…
Discussion
गंभीर कदम
पार्ट 1 और 2
वहाँ एक तुल्यकालिक चेचक संक्रमण की स्थापना के लिए कई महत्वपूर्ण कदम उठाए हैं, पहली बार जा रहा वायरस से सावधान sonication (या trypzinizing), क्रम में वायरस कणों disaggregate. चेचक उच्च कु?…
Acknowledgements
व्हाइटहेड संस्थान अध्येता फंड
Materials
Material Name
Type
Company
Catalogue Number
Comment
TRIzol Reagent
Reagent
Invitrogen
15596-026
Similar reagents, such as TriPure from Roche, will also work.
Assarsson, E., Greenbaum, J. A., Sundström, M., Schaffer, L., Hammond, J. A., Pasquetto, V., Oseroff, C., Hendrickson, R. C., Lefkowitz, E. J., Tscharke, D. C., Sidney, J., Grey, H. M., Head, S. R., Peters, B., Sette, A. A. Reply to Satheshkumar and Moss: Poxvirus transcriptome analysis.Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, E63-E64 (2008).
Yen, J., Golan, R., Rubins, K. Vaccinia Virus Infection & Temporal Analysis of Virus Gene Expression: Part 1. J. Vis. Exp. (26), e1168, doi:10.3791/1168 (2009).