רעילות נייד של Nanogenomedicine בקו MCF-7 נייד: assay MTT
Summary
Assay MTT היא assay colorimetric קל לשעתקו להערכת כדאיות התא המבוסס על הפחתה של MTT צהוב וייצור של formazan מסיס במים סגול. כאן, לקיומה של MCF-7 תאים על הטיפול nanogenomedicine הוערך.
Abstract
Cytotoxicity של nanogenomedicine עתידני (למשל, התערבות RNA קצר antisense) עלול לעכב את הפיתוח הקליני שלה. מבין אלה, את התרופה גן מבוססי ו / או הספק שלו עלולים לעורר רעילות הסלולר. להערכת cytotoxicity כאלה, מתודולוגיה נפוצה היא תלויה במידה רבה על ניצול של 3 – (4, 5-dimethyl-2-thiazolyl) -2, 5-diphenyl-2H-tetrazolium ברומיד (MTT) assay אשר כבר בשימוש נרחב כמו גישה colorimetric מבוסס על פעילות של אנזימים דהידרוגנז המיטוכונדריה בתאים. בחקירה הנוכחית, MCF-7 תאים היו מחוסן בצלחת-96 היטב על 50% confluency הם טופלו nanopolyplexes שונים נתון MTT assay לאחר 24 שעות. MTT מסיס במים צהוב עובר מטבוליזם על ידי תאים פעילים מבחינה מטבולית למים מסיסים סגול formazan, אשר מומס נוספת pH חיץ dimethylsulfoxide ו s Sornson 10.5. המוצר כתוצאה ניתן לכמת ידי לספקטרופוטומטריה באמצעות קורא צלחת ב 570 ננומטר.
Protocol
Discussion
Assay MTT נחשבת שיטה צדדי ובהתאם את יכולת הקיום של תאים יכול להיות מוערך על טיפולים שונים. הפקת formazan כתוצאה שנראה יחסית ברמה של מטבוליזם האנרגיה בתאים. לכן, ניתן למדוד את התאים מופעל מטבולית גם בהעדר התפשטות תאים. כמות formazan המיוצר הוא יחסי לכמות MTT במדיום הדגירה. אמנם, את ה?…
Acknowledgements
המחברים רוצים להכיר לתאי גזע טכנולוגיה שהיד גאזי חברות טבריז בהתאמה למתן DMEM ללא מים סטריליים פנול אדום להזרקה כמתנות.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 25 t-flask | Orange Scientific | 5510100 | ||
| PBS | Sigma-Aldrich | P3813 | ||
| Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium – high glucose | Sigma-Aldrich | D5671 | ||
| MTT | Sigma-Aldrich | M2128 | ||
| FBS | Sigma-Aldrich | F2442 | ||
| Penicillin 200,000 u/ml | CinnaGen | CR7913 | ||
| Streptomycin 200 mg/ml | CinnaGen | CR7912 | ||
| trypsin/EDTA | Sigma-Aldrich | T3924 | ||
| trypan blue | Sigma-Aldrich | T8154 | ||
| Superfect | Qiagen | 301105 | ||
| Polyfect | Qiagen | 301305 | ||
| EGFR antisense | MWG biotech | |||
| Scrambled antisense | MWG biotech | |||
| DMEM without phenol red | Gibco | 11880 | ||
| Glycine | Sigma | G8898 | ||
| hemocytometer | HBG | |||
| 8-channel pipette | TreffLab Transferpette | 96.9918.10.1 | ||
| Disposable syringe filter | IWAKI | 2052-025 | ||
| Plate reader equipped with 570 nm &630 nm filters | Biotek ELx808 | ELX808 | ||
| 96-well plate with lid (flat bottom) | IWAKI | 3860-096 | ||
| Laminar flow hood | Esco class II Biosafety Cabinet | |||
| CO2 Incubator | ASTEC |
References
- Plumb, J. A., Milroy, R., Kaye, S. B. Effects of the pH Dependence of 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium Bromide-Formazan Absorption on Chemosensitivity Determined by a Novel Tetrazolium-based Assay. Recherche en cancérologie. 49, 4435-4435 (1989).
- Mosmann, T. Rapid Colorimetric Assay for Cellular Growth and Survival: Application to Proliferation and Cytotoxicity Assays. Journal of Lmmunological Methods. 65, 55-55 (1983).
- Yang, M. Energy and Redox States in the C6 Glioma Cells Following Acute Exposure to Zn, Se +4 , and Se +6 and the Correlation with Apoptosis. Toxicology Mechanisms and Methods. 16 (1), 13-13 (2006).
- Spinner, D. M., Bartlett, J. M. S. . MTT Growth Assays in Ovarian Cancer, in Ovarian Cancer: Methods and Protocols. , 175-177 (2000).
