नवोदित खमीर में Replicative लाइफ स्पैन मापने
Summary
इस अनुच्छेद में हम खमीर माँ कोशिकाओं के replicative जीवन अवधि को मापने के लिए एक सामान्य प्रोटोकॉल उपस्थित थे.
Abstract
उम्र बढ़ने के एक अपक्षयी प्रक्रिया सेलुलर घटकों और मृत्यु दर में जिसके परिणामस्वरूप organelles के एक प्रगतिशील गिरावट के द्वारा विशेषता है. नवोदित खमीर<em> Saccharomyces cerevisiae</em> बड़े पैमाने पर किया गया इस्तेमाल किया गया है उम्र बढ़ने के जीव विज्ञान का अध्ययन, और खमीर दीर्घायु के कई निर्धारकों कीड़े सहित multicellular eukaryotes में संरक्षित किया जा दिखाया गया है मक्खियों, और चूहों<sup> 1</sup>. विभिन्न संदर्भों में कोशिकाओं के जीवन काल को मापने के द्वारा आसानी मात्रा निर्धारित उम्र जुड़े phenotypes, खमीर में उम्र बढ़ने की कमी के कारण किया गया है लगभग अनन्य रूप से आम उपयोग में दो अलग जीवन काल मानदंड के साथ, assayed<sup2></sup>. कालानुक्रमिक जीवन अवधि है कि एक माँ सेल एक गैर विभाजित राज्य निष्क्रियता की तरह, में जीवित रह सकते हैं समय की लंबाई करने के लिए संदर्भित करता है, और multicellular eukaryotes में पोस्ट mitotic कोशिकाओं की उम्र बढ़ने के लिए एक मॉडल के रूप में सेवा करने का प्रस्ताव है. Replicative जीवन काल में, इसके विपरीत में, बेटी senescence के लिए पहले एक माँ सेल द्वारा उत्पादित कोशिकाओं की संख्या संदर्भित करता है, और mitotically सक्रिय कोशिकाओं में उम्र बढ़ने के एक मॉडल प्रदान सोचा. यहाँ हम नवोदित खमीर माँ कोशिकाओं के replicative जीवन अवधि को मापने के लिए एक सामान्यीकृत प्रोटोकॉल उपस्थित थे. replicative जीवन अवधि परख के लक्ष्य निर्धारित करने के लिए कितनी बार प्रत्येक माँ सेल कलियों है. माँ और बेटी की कोशिकाओं को आसानी से एक मानक प्रकाश माइक्रोस्कोप, (कुल बढ़ाई 160X) जैसे Zeiss 40 Axioscope या किसी अन्य तुलनीय मॉडल का उपयोग कर एक अनुभवी अनुसंधानकर्ता द्वारा विभेदित किया जा सकता है है. माँ कोशिकाओं से बेटी कोशिकाओं के शारीरिक जुदाई एक पुस्तिका फाइबर ऑप्टिक एक सुई के साथ सुसज्जित micromanipulator का उपयोग करने के लिए हासिल की है. विशिष्ट प्रयोगशाला खमीर उपभेदों प्रति 20-30 माँ बेटी कोशिकाओं का उत्पादन और एक जीवन काल प्रयोग 2-3 सप्ताह की आवश्यकता है.
Protocol
Acknowledgements
इस काम एलिसन मेडिकल फाउंडेशन से एम.के. और BKK के लिए एक अनुदान द्वारा समर्थित किया गया था. एम के एक एलिसन एजिंग में मेडिकल फाउंडेशन नई विद्वान है. हम सहायता के लिए शूटिंग के दौरान सौम्या Kotireddy धन्यवाद देना चाहूंगा.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Agar | Reagent | Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems) | DF0145-17-0 (214530) | |
| Bacto-Peptone | Reagent | Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems) | DF0118-17-0 (211677) | |
| Yeast Extract | Reagent | Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems) | DF0886-17-0 (288620) | |
| Glucose |
References
- Kaeberlein, M., Burtner, C. R., Kennedy, B. K. Recent developments in yeast aging. PLoS Genet. 3, (2007).
- Kaeberlein, M., Conn, P. M. . Handbook of models for human aging. , 109-120 (2006).
- Smith, E. D. Quantitative evidence for conserved longevity pathways between divergent eukaryotic species. Genome Res. 18, 564-570 (2008).
- Steinkraus, K. A., Kaeberlein, M., Kennedy, B. K. Replicative aging in yeast: the means to the end. Annu Rev Cell Dev Biol. 24, 29-54 (2008).
- Murakami, C. J., Burtner, C. R., Kennedy, B. K., Kaeberlein, M. A method for high-throughput quantitative analysis of yeast chronological life span. J Gerontol A Biol Sci Med Sci. 63, 113-121 (2008).
- Jiang, J. C., Jaruga, E., Repnevskaya, M. V., Jazwinski, S. M. An intervention resembling caloric restriction prolongs life span and retards aging in yeast. Faseb J. 14, 2135-2137 (2000).
- Kaeberlein, M., Kirkland, K. T., Fields, S., Kennedy, B. K. Sir2-independent life span extension by calorie restriction in yeast. PLoS Biol. 2, E296-E296 (2004).
- Lin, S. J., Defossez, P. A., Guarente, L. Requirement of NAD and SIR2 for life-span extension by calorie restriction in Saccharomyces cerevisiae. Science. 289, 2126-2128 (2000).
- Kaeberlein, M., Kennedy, B. K. Large-scale identification in yeast of conserved ageing genes. Mech Ageing Dev. 126, 17-21 (2005).
- Kaeberlein, M. Regulation of yeast replicative life span by TOR and Sch9 in response to nutrients. Science. 310, 1193-1196 (2005).
