بعد تشكيل الأنبوب العصبي ، ويضيق الظهارة العصبية والطيات في حين أن أنبوب يملأ مع السائل النخاعي الجنينية (eCSF) لتشكيل البطينين المخ الجنينية. قمنا بتطوير هذه التقنية حقن البطين لتصور أفضل السوائل تملأ الفضاء على النقيض من الشكل ظهاري في جنين حي.
Abstract
مطلوب السليم تشكيل بطين الدماغ أثناء التطور الجنيني للدماغ وظيفة المخ المعتادة. البطينات الدماغية هي تجاويف الحفظ للغاية داخل المخ التي تمتلئ السائل النخاعي. في الزرد ، وبعد تشكيل الأنبوب العصبي ، والظهارة العصبية يخضع لسلسلة من التشنج والطيات في حين يملأ بسائل مما أدى إلى تشكيل بطين الدماغ. نحن في حاجة من أجل فهم عملية تشكيل البطين ، والتغيرات التي تحدث في شكل الظهارية العصبية في نفس الوقت ، وسيلة لتصور الفضاء البطين بالمقارنة مع أنسجة المخ. ومع ذلك ، فإن طبيعة الأجنة الزرد الشفافية يجعل من الصعب التفريق بين الأنسجة من الفضاء البطين. ولذلك ، قمنا بتطوير تقنية الحقن بطين الدماغ حيث يتم ملء الفراغ البطين مع صبغة الفلورسنت والتقط بواسطة المجهر وbrightfield الفلورسنت. ثم تتم معالجة brightfield والصور الفلورسنت وفرضه في Photoshop. هذا الأسلوب يسمح للتصور من الفضاء البطين مع صبغة الفلورسنت ، وبالمقارنة مع شكل الظهارة العصبية في صورة brightfield. ويمكن استخدام حقن الدماغ الزرد في البطين من 18 ساعة من خلال التسميد آخر مراحل اليرقات في وقت مبكر. وقد استخدمنا هذه التقنية على نطاق واسع في دراساتنا تشكيل بطين الدماغ والتشكل ، وكذلك في وصف المسوخ التشكل الدماغ (1-3).
Protocol
بروتوكول الجزء 1 : الاستعداد للmicroinjection التحضير للحقن عن طريق سحب الإبر الشعرية باستخدام إبرة سوتر مجتذب الآلات. شغل الإبرة مع صبغة الفلورسنت (مثل تكساس و?…
Discussion
نحن في هذا الفيديو لشرح كيفية حقن صبغة الفلورسنت (تكساس الأحمر ديكستران) في الدماغ الزرد النامية البطينين. وتستخدم هذه الطريقة لتصور الفضاء بطين الدماغ على النقيض من الظهارة العصبية المحيطة بها ومفيد للغاية في تحديد شكل مساحة البطين وكذلك على شكل أنسجة المخ المحيطة …
Acknowledgements
فإن الكتاب أود أن أشكر لورا لوري آن الذين طوروا هذه التقنية في المختبر. معتمد من قبل النظام المنسق NIHMH70926. كان مدعوما من قبل جنيفر Gutzman الزمالة CSBi / ميرك ما بعد الدكتوراه.
Materials
Material Name
Type
Company
Catalogue Number
Comment
Forceps
Tool
Fine Science Tools
11252-20
Capillary Tubes (needles)
Tools
Frederick Haer and Co.
30-30-1
Agarose-Coated dishes
Tools
Agarose (Seakem GTG; Lonza) Dishes (Corning)
Agarose (50027) Dishes (430166)
Make agarose approximately 2-3 mm deep in the dish depending on the stage of embryo you are injecting
Dissecting Microscope
Microscope
Zeiss Stereomicroscope Stemi SV 6
Microscope Camera with Fluorescence capabilities and with image capture software
Tools
1-200 μ pipette tips
Tools
Tip One, US Scientific
1111-0806
These are the perfect size to poke the holes in the agarose and have the embryos fit perfectly.
Photoshop
Image Analysis
Adobe
Embryo Loop
Tools
Make these yourself with a glass pipette and hair or fishing line and seal with beeswax.
Microinjector
Tools
Medical Systems Research Products Harvard Apparatus
PL1-100
Needle Puller
Tools
Sutter Instruments
Settings (Heat 785, Pull 70, Velocity 40, Time 70).