عدسة التنمية تنطوي على تفاعلات مع الأنسجة الأخرى. وتتميز العديد من المسوخ الزرد العين عن طريق عدسة صغيرة الحجم بصورة غير طبيعية. هنا نظهر تجربة زرع عدسة لتحديد ما إذا كان هذا النمط الظاهري هو نتيجة لأسباب ذاتية أو تفاعلات مع الأنسجة التالفة التي تحيط العدسة.
Abstract
عدسة يلعب دورا هاما في تطوير الكأس البصرية [1،2]. باستخدام الزرد باعتباره النموذج الحي ، ويمكن تناول المسائل المتعلقة بالتنمية العدسة. والزرد مفيد للدراسات الجينية نظرا لخصائص مفيدة عدة ، بما في ذلك صغر الحجم ، وخصوبة عالية ، ودورة حياة قصيرة ، وسهولة العناية. عدسة التنمية يحدث بسرعة في الزرد. بنسبة 72 HPF ، العدسة الزرد ناضجة وظيفيا [3]. وفرة الموارد الوراثية والجزيئية المتاحة لدعم البحوث في الزرد. بالإضافة إلى ذلك ، التشابه في العين الزرد لتلك الفقاريات الأخرى يوفر أساسا لاستخدامه نموذجا ممتازا للحيوانات عيوب الإنسان [4-7]. المسوخ الزرد يحمل عدة تشوهات العدسة ، بما في ذلك مستويات عالية من موت الخلايا ، والتي في بعض الحالات يؤدي إلى انحطاط كامل للأنسجة عدسة [8].
لتحديد ما إذا كان الشذوذ العدسة هي نتيجة لأسباب ذاتية أو لخلل التفاعل مع الأنسجة المحيطة بها ، ويتم تنفيذ زرع عدسة داخل العين متحولة من النوع البري. يتم تشريح بعناية الإبر المعدنية باستخدام النار مصقول ، والعدسات متحولة أو البرية نوع من الحيوانات المانحة ، وتحويلها إلى المضيف. لتمييز الأنسجة من النوع البري ومتحولة ، يتم استخدام خط المعدلة وراثيا والجهة المانحة. هذا الخط يعبر عن غشاء محدد GFP في جميع الأنسجة ، بما في ذلك العدسة. زرع هذه التقنية أداة أساسية في دراسات المسوخ عدسة الزرد.
Protocol
الجزء 1 : تحضير الأجنة في هذا البروتوكول ، وسوف نستخدم الرمز للدلالة ي ي س ص عدسة الزرد افتراضية متحولة. تتم المحافظة على السلالات الزرد في ظروف معيشية سيئة في منشأة الأسماك 28…
Discussion
عدة خطوات تتطلب اهتماما خاصا خلال زرع عدسة.
شحذ الإبر : إنه من الأفضل أن تعد الإبر عدة قبل تنفيذ زرع العدسة ، وغيض من الإبر ينبغي أن تكون رقيقة قدر الإمكان. وهناك أكثر سمكا إبرة المسيل للدموع الأنسجة بسبب قطرها على نطا?…
Acknowledgements
يتبع هذا الإجراء إلى حد كبير على تقنية زرع المتقدمة للأسماك الكهف من قبل مختبر جيفري بيل.
Zhang , Y., McCulloch, K., Malicki, J. Lens Transplantation in Zebrafish and its Application in the Analysis of Eye Mutants. J. Vis. Exp. (28), e1258, doi:10.3791/1258 (2009).