Объективы трансплантации в данио рерио и его применение в анализе глаз Мутанты
Summary
Объективы развития предполагает взаимодействие с другими тканями. Несколько мутантов глаз данио рерио характеризуются аномально малый размер объектива. Здесь мы показываем, эксперимент объектив трансплантации определить, является ли этот фенотип из-за внутренних причин или дефектные взаимодействия с тканями, которые окружают линзы.
Abstract
Линзы играет важную роль в развитии глазного бокала [1,2]. Использование данио, как модель организма, вопросы, касающиеся развития линзы могут быть решены. Данио полезно для генетических исследований из-за нескольких выгодных характеристик, в том числе небольшие размеры, высокую плодовитость, короткий жизненный цикл, и простота ухода. Объективы развитие происходит быстрее в данио. К 72 HPF, данио рерио линза функционально зрелые [3]. Обильные генетические и молекулярные ресурсы для поддержки исследований в данио. Кроме того, сходство данио глаз, чтобы у других позвоночных, обеспечивает основу для ее использования в качестве отличной моделью животным человеческие пороки [4-7]. Несколько мутантов данио выставку объектив аномалий, включая высокий уровень гибели клеток, которые в некоторых случаях приводит к полной дегенерации тканей линзы [8].
Для определения того, объектив отклонения из-за внутренних причин или дефектные взаимодействия с окружающими тканями, трансплантация мутант линзы в дикого типа глаз не выполняется. Использование пожарной полированного металла иглы, мутант или дикого типа линз тщательно расчлененный от донора животное, и переданы в хосте. Чтобы отличить дикого типа и мутантных тканей, трансгенной линии используется в качестве донора. Эта линия выражает мембраной GFP во всех тканях, в том числе линза. Этот метод трансплантации является важным инструментом в изучении мутантов данио линзы.
Protocol
Discussion
Несколько шагов требуют особого внимания при смене объективов трансплантации.
- Заостренный игл: Лучше подготовить несколько игл перед проведением трансплантации линзы, а кончик иглы должны быть как можно тоньше. Толстая игла порвется больше ткани из-за его более широкий диамет?…
Acknowledgements
Эта процедура следует в значительной степени технику трансплантации, разработанные для пещера рыбы лаборатории Билл Джеффри.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 0.1mm diameter tungsten wire | A Johnson Matthey | 45086 | ||
| Agarose(low melting point) | Sigma | 39346 | ||
| Borosilicate glass capillaries | World Precision Instruments | TW 100-4 | ||
| Forceps | Dumont #5 | 11252-30 | ||
| Pasteur pipette | Fisher | 13-678-20C | ||
| Pipette pump | Fisher | 13-683C | ||
| Petri Dish | CardinalHealth | D1906 | ||
| Penicillin-streptomycin | GIBCO | 15140-122 |
References
- Thut, C. J., Rountree, R. B., Hwa, M., Kingsley, D. M. A large-scale in situ screen provides molecular evidence for the induction of eye anterior segment structures by the developing lens. Dev Biol. 231, 63-76 (2001).
- Yamamoto, Y., Jeffery, W. R. Central role for the lens in cave fish eye degeneration. Science. 289, 631-633 (2000).
- Easter, S. S., Nicola, G. N. The development of vision in the zebrafish(Danio rerio). Dev Biol. 180, 646-663 (1996).
- Schmitt, E., Dowling, J. Early eye morphogenesis in the zebrafish. Brachydanio rerio. J.comp. Neuro. 344 (4), 532-542 (1994).
- Malicki, J. Harnessing the power of forward genetics–analysis of neuronal diversity and patterning in the zebrafish retina. Trends Neurosci. 23 (11), 531-541 (2000).
- Malicki, J., Pujic, Z., Thisse, C., Thisse, B., Wei, X. Forward and reverse genetic approaches to the analysis of eye development in zebrafish. Vision Res. 42 (4), 527-533 (2002).
- Avanesov, A., Malicki, J. Approaches to study neurogenesis in the zebrafish retina. Methods Cell Biol. 76, 333-384 (2004).
- Vihtelic, T. S., Hyde, D. R. Zebrafish mutagenesis yields eye morphological mutants with retinal and lens defects. Vision Res. 42, 535-540 (2002).
- Godinho, L., Mumm, J. S., Williams, P. R., Schroeter, E. H., Koerber, A., Park, S. W., Leach, S. D., Wong, R. O. Targeting of amacrine cell neurites to appropriate synaptic laminae in the developing zebrafish retina. Development. Nov 132, 5069-5079 (2005).
