HC11 differenziazione lattogenica può essere caratterizzata dalla formazione di strutture a cupola denominata mammospheres. Le strutture possono essere elencati mediante microscopia a contrasto di fase per aiutare a quantificare la differenziazione lattogenica.
Abstract
Una misura fenotipica comunemente usato per determinare il grado di differenziazione lattogenica nel topo colture di cellule epiteliali mammarie è la formazione di strutture cellulari a forma di cupola denominata mammospheres<sup> 1</sup>. Il HC11 linea cellulare è stata utilizzata come sistema modello per lo studio della regolazione della differenziazione mammaria lattogenica sia<em> In vitro</em> E<em> In vivo</em<sup> 2</sup>. Il HC11 cellule si differenziano e sintetizzare proteine del latte in risposta al trattamento con ormoni lattogenica. In seguito la crescita di HC11 topo cellule epiteliali mammarie di confluenza, differenziazione lattogenica è stata indotta con l'aggiunta di una combinazione di ormoni lattogenica tra desametasone, insulina e prolattina, di cui il DIP. Il HC11 cellule indotte a differenziare sono stati fotografati a volte fino a 120 ore dopo l'induzione della differenziazione e del numero di mammospheres che è apparso in ogni cultura era enumerato. Le dimensioni del mammospheres individuale si correla con il grado di differenziazione e questo è raffigurato nelle immagini delle cellule differenziazione.
Protocol
Il HC11 cellule sono state coltivate a confluenza per 6 giorni in RPMI 1640 medium supplementato con 10% di siero di vitello fetale, insulina 5μg/ml, 10 HEPES mM, 10ng/ml fattore di crescita epidermico (EGF) per stabilire la competenza. Le cellule sono state lavate con PBS e mantenuti in terreni di coltura senza FEG per 24 ore. Per indurre la differenziazione lattogenica le cellule sono state incubate nei media differenziazione, cioè RPMI con desametasone (10 -6 M), l'insulina (5 mg / ml) e prolatti…
Discussion
Affinché questa tecnica per avere successo e di ottima qualità, le cellule epiteliali deve essere mantenuta a confluenza prima di essere indotto con gli ormoni lattogenica. Ci possono essere situazioni in cui ci sono mammospheres numerosi, il che rende difficile la quantificazione. Così, ai fini quantitativa è meglio fotografare la mammospheres in un punto momento in cui il numero di mammospheres è in grado di essere contati.
Mentre ci sono diversi marcatori molecolari per determinare i…
Acknowledgements
Diretto da fondi dal Congresso per la ricerca medica del Fondo di finanziamento (DAMD17-01-0264) di ML Cutler e United States Military Cancer Institute di ML Cutler sostenuto il lavoro.
Morrison, B., Cutler, M. L. Mouse Mammary Epithelial Cells form Mammospheres During Lactogenic Differentiation. J. Vis. Exp. (32), e1265, doi:10.3791/1265 (2009).