Dendra2 photocommutation travers la fenêtre d'imagerie mammaire
Summary
Photocommutation intravitale et de suivi des Dendra2 marqué les cellules tumorales à travers la fenêtre d'imagerie mammaire est une technique qui permet d'imager le comportement métastatique des cellules tumorales dans des microenvironnements tumoraux choisis sur une échelle de temps de jour.
Abstract
Dans la dernière décennie, la microscopie intravitale des tumeurs mammaires chez la souris et le rat à une seule cellule de résolution<sup> 1-4</sup> A abouti à des informations importantes sur les mécanismes du comportement métastatique telles que la migration, l'invasion et intravasation des cellules tumorales<sup> 5, 6</sup>, L'angiogenèse<sup> 3</sup> Et la réponse immunitaire des cellules<sup> 7-9</sup>. Nous avons récemment rapporté une technique à l'image orthotopique carcinomes mammaires sur plusieurs séances d'imagerie intravitale chez la souris vivante<sup> 10</sup>. Pour cela, nous avons développé une fenêtre d'imagerie mammaire (MIW) et des paramètres optimisés pour l'imagerie Dendra2<sup> 11</supPhotocommutation> et l'imagerie<em> In vivo</em>. Ici, nous décrivons le protocole pour la fabrication de MIW, l'insertion de la MIW sur le dessus d'une tumeur et l'imagerie des cellules tumorales Dendra2 marqué à l'aide d'une boîte d'imagerie sur mesure. Ce protocole peut être utilisé pour l'image du comportement métastatique des cellules tumorales dans des microenvironnements distincts dans les tumeurs et permet à l'imagerie à long terme des vaisseaux sanguins, les cellules tumorales et les cellules hôtes.
Protocol
Acknowledgements
Ce travail a été soutenu par le Département américain de la Défense (BC075554 à BG et BC061403 à DK), US National Institutes of Health (U54GM064346 d'JvR; CA100324 à JC, JES et JW; CA77522 à JES, U54CA126511 à JC et BG). Nous remercions D. Entenberg de l'aide pour la microscopie, M. Rottenkolber pour les aider dans la fabrication de la boîte de l'imagerie et J. Pollard (Albert Einstein College of Medicine) pour l'anticorps F4/80.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| PBS w/o Ca, Mg | Gibco | 14190-144 | ||
| Trypsin | Gibco | 25300 | ||
| HBSS | Gibco | 14025 | ||
| DMEM media (MDA-MB-231 cells) | Gibco | 11965 | ||
| Isoflurane(Aerrane) | Baxter | # NDC 10019-773-40 | ||
| SCID mouse | NCI | N/A | ||
| Culture dishes | BD Falcon | 353003 | Custom Order | |
| Circular coverslip 8 mm | Scientific, Inc. | 8CIR-1-FIS |
References
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