Обнаружение белка убиквитинирования
Summary
Убиквитинирования является ключевым посттрансляционной модификации осуществляется набор из трех ферментов. Мутации генов, участвующих в этой модификации, связанные с различными заболеваниями человека. Здесь мы описываем протоколов для обнаружения белка убиквитинирования в культуре клеток<em> В естественных условиях</em> И пробирки<em> В пробирке</em>.
Abstract
Убиквитинирования, ковалентное присоединение полипептид убиквитин для белков-мишеней, является ключевым посттрансляционной модификации осуществляется набор из трех ферментов. Они включают в себя убиквитин-активации фермента E1, убиквитин-сопряжения фермент Е2, Е3 и убиквитин лигазы. В отличие от Е1 и Е2, Е3 лигазы убиквитин дисплей субстратной специфичности. С другой стороны, многочисленные deubiquitylating ферменты играют свою роль в обработке polyubiquitinated белков. Убиквитинирования может привести к изменению стабильность белков, клеточной локализации и биологической активности. Мутации генов, участвующих в убиквитинирования / deubiquitination путь или изменили убиквитин функции системы связаны с множеством различных заболеваний человека, таких как различные виды рака, нейродегенеративные, а также нарушения обмена веществ. Обнаружение измененной или нормальной убиквитинирования белков-мишеней может обеспечить лучшее понимание о патогенезе этих заболеваний. Здесь мы описываем протоколов для обнаружения белка убиквитинирования в культуре клеток<em> В естественных условиях</em> И пробирки<em> В пробирке</em>. Эти протоколы могут быть также использованы для обнаружения других убиквитин-как небольшая модификация молекулы, такие как sumolyation и neddylation.
Protocol
Discussion
В этой презентации мы впервые описаны шаги, которые позволяют обнаружения убиквитин модификации на белок в культивируемых клетках млекопитающих. С целью выявления убиквитинирования именно на белок, а не на нековалентно белки взаимодействуют, мы использовали жесткое условие для лизи?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Эта работа была поддержана грантами NIH RO1 DC006497, RO1 NS057289 и PO1 ES016738 (до Z. Zhang); Калифорнийского института регенеративной медицины гранты RS1-00331-1 и RL1-00682-1 (до Z. Zhang), американский Паркинсона Болезнь ассоциации (до Я. Чжан и Ю. С. Чу) и Майкл Дж. Фокс Фонд исследований Паркинсона (Z. Zhang).
References
- Xiong, H. PINK1, and DJ-1 form a ubiquitin E3 ligase complex promoting unfolded protein degradation. J Clin Invest. 119, 650-660 (2009).
- Xirodimas, D. P., Saville, M. K., Bourdon, J. C., Hay, R. T., Lane, D. P. Mdm2-mediated NEDD8 conjugation of p53 inhibits its transcriptional activity. Cell. 118, 83-97 (2004).
- Didier, C. RNF5, a RING finger protein that regulates cell motility by targeting paxillin ubiquitination and altered localization. Mol Cell Biol. 23, 5331-5345 (2003).
- Laney, J. D., Hochsetrasser, M. Unit 14.5 Analysis of Protein Ubiquitination. Current Protocols in Protein Science. , 14.5.1-14.5.11 (2002).
