Combinant des nerfs périphériques et de greffe matrice de modulation de réparer le cordon Rat épinière lésée

Résumé

Lésions traumatiques de la moelle épinière interrompt la communication avec le cerveau. Pour restaurer la connectivité perdue, nous utilisons une greffe du nerf périphérique pour fournir un substrat pour les fibres de régénération en combinaison avec les facteurs neurotrophiques et la matrice de modulation des enzymes pour éliminer les molécules inhibitrices de promouvoir la croissance à longue distance.

Résumé

Lésions traumatiques de la moelle épinière (SCI) provoque la mort des neurones, dérèglement des fonctions motrices et des fibres nerveuses sensorielles (axone) et la perturbation des voies de communication avec le cerveau. Un des objectifs de notre recherche est de promouvoir la régénération des axones pour restaurer la connectivité à travers le site de la lésion. Pour ce faire nous avons développé un nerf périphérique (NP) greffer technique où les segments de nerf sciatique sont soit placé directement entre les extrémités endommagées de la moelle épinière ou sont utilisés pour former un pont sur la lésion. Il ya plusieurs avantages à cette approche par rapport à la transplantation de tissus d'autres neurones; axones régénérant peut être dirigé vers une zone cible spécifique, le nombre et la source de régénération des axones est facilement déterminée par des techniques de traçage, la greffe peut être utilisé pour des expériences électrophysiologiques pour mesurer récupération fonctionnelle associée à des axones dans le greffon, et il est possible d'utiliser un nerf autologues pour réduire la possibilité de rejet de greffe. Dans notre laboratoire, nous avons effectué deux autologue (donneur et receveur sont la même animal) et hétérologues (donneur et receveur sont différents animaux) des greffes avec des résultats comparables. Cette approche a été utilisée avec succès dans des situations de blessures aiguës et chroniques. Axones régénérés qui atteignent l'extrémité distale de la greffe PN échouent souvent à prolonger de nouveau dans la moelle épinière, nous utilisons donc des microinjections chondroïtinase à dégrader des molécules inhibitrices associées à du tissu cicatriciel entourant le domaine de la SCI. Dans le même temps, nous avons constaté que la fourniture de croissance exogène et les molécules trophiques encourage plus longue distance repousse axonale dans la moelle épinière. Plusieurs mois après la transplantation nous effectuons une série de tests anatomiques, comportementales et électrophysiologiques pour évaluer la récupération de la fonction de nos animaux blessés médullaires. Cette approche expérimentale a été utilisée avec succès dans plusieurs modèles lésion de la moelle épinière, à différents niveaux de blessures et de différentes espèces (souris, rat et le chat). Surtout, l'approche du nerf périphérique greffage est efficace dans la promotion de régénération par les neurones aiguë et chronique blessés.

Protocole

1) Préparation de la chirurgie microscopique

1. La station chirurgicale doit être nettoyé et désinfecté avec une solution eau de Javel diluée avant d'installer les instruments et les matériaux accessoires. Les instruments seront autoclavés 1 jour avant la chirurgie et stocké dans un récipient stérile. Allumez le stérilisateur à chaud talon (Outils Fine Science) utilisé pour éliminer les agents pathogènes et des contaminants microbiens provenant d'instruments entre les procédures sur les différents animaux.
2. Branchez la barrière thermique utilisé pour maintenir la température du corps pendant l'intervention chirurgicale. Énoncer des cotons....

Discussion

1. Pour la reproductibilité de l'expérience, il est important que le niveau de la moelle épinière être uniforme d'animal à animal. Par conséquent, il est essentiel que le processus approprié pour laminectomie vertébrale être identifié. Parce que nous sommes en utilisant un modèle ou une lésion hémisection transection pour cette étude il n'ya aucune ambiguïté au sujet de la taille de la lésion ou si spécifiques tracts épinière ont été blessés ou épargnés.
2. Il est nécessaire que le nerf périphérique être pré-dégénéré av.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Suture de soie 10-0	ArosSurgical	T5A10N10
Suture de soie 6-0	McKesson	2693
Ampicilline	McKesson	483549
Anticorps anti-cFos	Sigma-Aldrich	F7799
Dextrane aminée biotinylée	Invitrogen	D7135
Buprénorphine (0,3 mg/mL)	McKesson	12496075701
Chondroïtinase ABC	Associates of Cape Cod	100332-1A
Euthasol	Webster Veterinary	07-805-9296
Solution saline tamponnée de Hanks	Cellgro	21-021-CV
Isoflurane	Henry Schein	209-1966
Clips pour plaies de Michel	Fine Science Tools	12040-02
Kits Neurotrace	Invitrogen	N7167
True Blue	Sigma-Aldrich	T5891
Xenodine	Webster Veterinary	92201
Stérilisateur à billes chauffantes	Fine Science Tools
Roue d'exercice forcé	Lafayette Instruments
Système TreadScan	Clever System
Dispositif d'impact Infinite Horizon	Precision Systems and Instrumentation
Dispositif de stimulation magnétique	Magstim