La récolte et la préparation Drosophile Les embryons destinés à l'enregistrement électrophysiologique et autres procédures

Résumé

Cette technique expose les neuromusculaire Drosophila embryonnaire pour l'immunohistochimie ou l'enregistrement électrophysiologiques. Il est utile pour étudier les événements précoces de développement neuromusculaire ou d'effectuer l'électrophysiologie dans des mutants qui ne peuvent pas éclore.

Résumé

Drosophile est un modèle de premier génétique pour l'étude du développement embryonnaire et à la fois fonctionnelles en neurosciences. Traditionnellement, ces champs sont assez isolées les unes des autres, avec des histoires largement indépendantes et les communautés scientifiques. Cependant, l'interface entre ces domaines généralement disparates sont les programmes de développement qui sous-tendent l'acquisition de propriétés fonctionnelles électriques de signalisation et de la différenciation des synapses chimiques fonctionnels pendant les phases finales de la formation des circuits neuronaux. Cette interface est une zone cruciale pour l'enquête. Chez la drosophile, ces phases de développement fonctionnel se produisent pendant une période de <8 heures (à 25 ° C) pendant le dernier tiers de l'embryogenèse. Cette période tardive de développement a été longtemps considérés comme insurmontables à cause enquête pour le dépôt d'un dur, la cuticule épidermique imperméable. Une percée a été l'avance de l'application de l'eau-de polymérisation de la colle chirurgicale qui peut être appliqué localement à la cuticule pour permettre une dissection contrôlée des embryons à un stade avancé. Avec une incision dorsale longitudinale, l'embryon peut être posé à plat, ce qui expose la corde nerveuse ventrale et la musculature paroi du corps d'une enquête expérimentale. Ce système a été largement utilisé pour isoler et caractériser des mutants génétiques qui altèrent la formation des synapses embryonnaire, et révéler ainsi les mécanismes moléculaires qui régissent la spécification et la différenciation des connexions synaptiques fonctionnelles synapse et propriétés de signalisation.

Protocole

Partie 1: matériel et fournitures

1. Un microscope de dissection est nécessaire pour une bonne dissections embryon; grossissement 40X est suggéré, avec oculaires 25X au maximum à augmenter le grossissement.
2. Pinces fines (numéro 5) sont requis pour la sélection manuelle des embryons et des devitellinization d'embryons.
3. Équipement pour faire et modifier des aiguilles de verre fine est nécessaire. Tiré de verre aiguilles sont nécessaires pour la dissection. Nous préférons le verre solide pour la dissection (durent plus longtemps), mais la norme de tubes de verre à parois épaisses (diamètre extérieur 1-1,5 mm) fonctionne aussi bien. Certai....

Discussion

Staging précis des embryons est essentielle en raison de la maturation rapide des propriétés fonctionnelles au cours du temps de seulement quelques heures. Plusieurs questions compliquent cette mise en scène. Premièrement, la plupart des chercheurs utilisent oeuf chronométré établit au embryons au stade, mais le temps de ponte peut varier énormément d'un animal à des conditions différentes (Broadie et al. 1992). En particulier, les femelles sur un régime alimentaire restreint tendent à retenir les oeufs fécondés pen.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Chambres de collecte d'embryons	Genesee Scientific	59-100 (pour boîte de 60 mm ; d'autres tailles disponibles)	Les chambres peuvent également être fabriquées maison à l'aide de béchers Tri-Pour perforés, comme illustré dans la vidéo
Sylgard 184	Dow Corning	Disponible auprès de diverses entreprises	La colle chirurgicale adhère mieux aux lamelles recouvertes de Sylgard
Tube en verre fin, diamètre extérieur de 1,0 à 1,5 mm	Divers		Pour tirer des aiguilles en verre fines destinées à la dissection et des tubes pour l'application de colle
Tuyau en plastique, à fixer au pipetage en verre pour aspiration buccale et application de colle	Tygon		Le diamètre intérieur du tuyau doit correspondre au diamètre extérieur du verre.