Флуоресценция На месте Гибридизации (FISH) протокола в человеческой сперме

Summary

Это видео-статья описывает, шаг за шагом, как обрабатывать сперму для достижения хорошего качества флуоресценции<em> На месте</em> Гибридизации на человеческие сперматозоиды. Подготовка получены могут быть использованы для скрининга анеуплоидии в контексте клинического диагноза.

Abstract

Анеуплоидии являются наиболее частыми хромосомных аномалий у человека. Большинство из этих нарушений в результате ошибки во время мейоза gametogenic процесса в родителях. В человеческих самцов, эти ошибки могут привести к производству сперматозоидов с числовым хромосомных аномалий, которые представляют повышенный риск передачи этих аномалий в потомстве.

По этой причине методика флуоресценции в гибридизация (FISH) на ядрах сперматозоидов стал протокол широко включены в контексте клинического диагноза. Эта практика позволяет оценить частоты численных хромосомных аномалий в гаметах пациентов, которые ищут генетические репродуктивного совет.

На сегодняшний день хромосом наиболее часто включаются в анализ спермы рыб хромосом X, Y, 13, 18 и 21.

Это видео-статья описывает, шаг за шагом, как обрабатывать и исправлять человеческие образцы спермы, как decondense и денатурировать спермы хроматина, как действовать, чтобы получить сперму подготовка рыбы, и, как визуализировать результаты на микроскоп. Особые замечания из наиболее важных шагов даны для достижения наилучших результатов.

Protocol

И. обработки проб и фиксации клеток Оставьте спермы в стерильных контейнерах при комнатной температуре в течение 20 минут, пока сжижения. Передача образца центрифуги трубки и вращать его в 1000 г. в течение 5 минут. Аккуратно снимите и выбросьте супернатант помощью пипетки…

Discussion

Этот протокол описывает процесс человеческого образцы спермы для получения препаратов сперматозоидов FISH. Используя этот протокол, можно анализировать хромосомные аномалии в мужских гамет. Сперматозоиды анеуплоидии скрининга заявки либо в контексте фундаментальных исследований и в…

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
1,4-Dithiothreitol (DTT)	Material	Roche	10197777001
2-Amino-2-(hydroxymethyl)-1,3-propanediol	Material	Roche	10708976001
Acetic acid	Material	Merck	100.063
AneuVysion® Multicolor DNA Probe Kit 20xSaline-Sodium Citrate 4,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI II) CEP 18/X/Y DNA probe NP-40 LSI 13/21 DNA probe	Material	Vysis Inc.	32-161075 30-805850 30-804941 30-171077 30-804820 30-171078
Centrifuge 5804R	Tool	Eppendorf
Centrifuge tube	Material	Nunc	347856
Coplin jar (glass)	Material	Barloworld Scientific	Hellendahl (ZCT278)
Coplin jar (plastic)	Material	Deltalab	191087
Cover slips (15×15)	Material	Knittel gläser	4600115
Cover slips (18×18)	Material	Knittel gläser	4600118
Diamond pencil	Material	Hammacher	335117010
Ethanol	Material	Merck	100.983
Formamide	Material	Roche	11814320001
Freezer	Tool	Zanussi
Gloves	Material	Sanyc	101/3300
HYBrite™	Tool	Vysis Inc.
Immersion Oil	Material	Olympus	35505
Incubator	Tool	Heraeus
Methanol	Material	Merck	106.009
Micropipette	Material	Labsystems	Finnpipette (4500000)
Micropipette replacement tip	Material	Daslab	16-2001
Nail varnish	Material	Quo-cosmetics
Olympus BX60 epifluorescence microscope	Tool	Olympus		Equipped with a triple-band filter for DAPI/Texas Red/FITC and single-band filters for Aqua, FITC and Texas Red.
Pasteur Pipette	Material	Rubilabor	211.0230
Phase contrast microscope	Tool	Nikon Diaphot
Plastic pipette (3ml)	Material	Deltalab	200007
Potassium chloride (KCl)	Material	Fluka	60128
Rubber cement	Material	Best-test
Slides	Material	Knittel gläser	4520022
Slide Saver Boxes	Material	Deltalab	19276.1
Sterile container	Material	Deltalab	409726
Syringe	Material	PentaFerte	002022300
Thermometer	Material	Comark Instruments, Inc	KM12
Tri-distilled water	Material
Triton X-100	Material	Sigma	9002-93-1
Tweezers	Material	B/Braun	Aesculap (BD224R)
Vertical laminar flow hood	Tool	Burdinola	OR-ST 1500
Vortex mixer	Tool	Fisher Scientific	FB15012
Water bath	Tool	Raypa®