Het visualiseren van de Beating Heart in Drosophila</em
Summary
Techniek die nodig is voor het visualiseren van het kloppend hart in de larven en volwassen<em> Drosophila</em> Worden gepresenteerd. Elke levensfase vraagt om een andere methodologie.
Abstract
De<em> Drosophila</em> Hart heeft onlangs ontpopt als een goed model voor onderzoek van de genetische, cellulaire en moleculaire mechanismen die ten grondslag liggen functie in myogene harten. Een belangrijke stap bij het onderzoeken van de hartfunctie in de vlieg is het vinden van een manier om het hart op een manier die haar myogene functie behouden, terwijl nog het toestaan het kloppend hart orgaan te worden geobserveerd en geregistreerd toegang. Twee verschillende methoden voor het observeren en vastleggen van het kloppende hart, zowel in larve en volwassen<em> Drosophila</em> Worden hier beschreven. Onze semi-intact voorbereiding met behulp van volwassen vliegen kunt u heldere visualisatie van de buik hart zonder tussenkomst van de gepigmenteerde nagelriem en de bovenliggende vet lichamen. Voor het opnemen van larvale hart klopt is het noodzakelijk om de larve, die het lichaam muur bewegingen waardoor het hart bewegingen die niet zijn gekoppeld aan een myocard contracties minimaliseert immobiliseren. Onze methodes produceren stabiele volwassen en larvale hart voorbereidingen die kan voor uren verslaan met snelheden van 1-3 Hz.
Protocol
Discussion
Het Drosophila model heeft bewezen een krachtig instrument dat genetische is gebruikt om een verscheidenheid aan wetenschappelijke vragen, variërend van embryonale ontwikkeling tot leren en geheugen adres. Onlangs is dit veelzijdige model organisme is gebruikt om de genetica van de hartfunctie te onderzoeken in de vliegen. Een aantal pogingen om het hart fysiologie kwantificeren bij volwassen Drosophila hebben vertrouwd op de waarnemingen in intacte vliegt door de buik cuticula. De meeste van deze benaderingen he…
Acknowledgements
KO wordt ondersteund door een subsidie van de American Heart Association.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Micro Dissecting Spring Scissors (curved) | Roboz | RS-5611 | Good for gross cuts (Step 3) | |
| Micro Dissecting Spring Scissors (straight) | Roboz | RS-5620 | ||
| Dumont #55 forceps | Fine Science Tools | 11295-51 | ||
| Dumont #5 forceps | Fine Science Tools | 11295-10 | ||
| Glass Capillaries, 100ul | VWR | 53432-921 | ||
| Glass Capillaries, fine | Science Products | GB100T8P | ||
| Pipette Puller | Sutter Equipment | P-97 | Both horizontal and vertical pipette pullers will work | |
| Plastic tubing | Tygon R-3603 | 1/16” inner diameter | for 100μl capillaries | |
| Plastic tubing | Tygon R-3603 | 1/32” inner diameter | for small capillaries | |
| Histoacryl® tissue adhesive | B.Braun, Melsungen |
References
- Ocorr, K., Reeves, N., Wessells, R. J., Fink, M., Chen, H. -. S. V., Akasaka, T., Yasuda, S., Metzger, J., Giles, W., Posakony, J. W., Bodmer, R. KCNQ potassium channel mutations cause cardiac arrhythmias in Drosophila that mimic the effects of aging. Proc Natl Acad Sci U S A. 104, 3943-3948 (2007).
- Broadie, K. S., Bate, M. Development of the embryonic neuromuscular synapse of Drosophila melanogaster. J Neurosci. 13, 144-166 (1993).
