本视频演示了如何来衡量使用荧光为基础的方法,通过细胞培养插入细胞的侵袭。
转移性细胞的特点是通过基底膜侵入的能力,并迁移到身体的其他部位。细胞必须能够同时打破基底膜以及以侵入迁移的分泌蛋白酶。屋宇署BioCoat肿瘤浸润系统提供了条件,使他们的侵入财产的评估细胞<em>在体外</em<sup> 1,2</sup>。它由一个BD猎鹰FluoroBlok 24 8.0微米孔径的PET膜已与BD基质胶基质涂层均匀的多孔插板式。这一层BD基质胶基质的统一作为一个重组基底膜<em>在体外</em>提供一个非侵入性的细胞真正障碍,同时提出了相应的的蛋白质结构研究入侵。涂层工艺的膜阻塞的毛孔,阻止非侵入性的细胞通过膜迁移。相比之下,侵入细胞能够分离并通过涂层膜迁移。定量细胞的侵袭,可以实现前或后细胞的侵袭标签与介质隔离集成电路,如荧光染料<sub> 12</sub>(3)或钙黄绿素上午,分别与测量侵入细胞的荧光。由于屋宇署FluoroBlok膜有效地阻止> 99%的效率从490-700 nm的光通过,荧光标记的细胞没有入侵未检测到一个自下而上的阅读荧光酶标仪。然而,已侵入细胞的膜底面不再屏蔽光源,并与各自的酶标仪检测。本视频演示了一个端点细胞侵袭实验,采用钙黄绿素AM检测入侵的细胞。
The authors have nothing to disclose.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
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BD BioCoat Tumor Invasion System | BD Biosciences | 354165 or 354166 | ||
HT-1080 and NIH/3T3 cells | ATCC | |||
Dulbecco’s Modified Eagle Medium (DMEM; serum-free) | ||||
Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline, without calcium and magnesium (DPBS) | ||||
BD Falcon FluoroBlok 24-Multiwell Insert System to be used as a cell migration control | BD Biosciences | 351157 or 351158 | ||
5% Fetal Bovine Serum in DMEM | ||||
BD Calcein AM Fluorescent Dye | BD Biosciences | 354216 or 354217 | ||
Hanks’ Balanced Salt Solution (HBSS) | ||||
BD Falcon 24-well plates for post cell invasion labeling | BD Biosciences | 351147 | ||
Fluorescence plate reader with bottom reading capabilities | PerkinElmer EnVision (R), TECAN Infinite (R), Molecular Devices SpectraMax (R), BioTek Synergy (TM), BMG LABTECH PHERAstar. |