Preparación Extienda los cromosomas de las células estaminales embrionarias para cariotipo
Summary
El cariotipo es una técnica sencilla y útil ampliamente utilizado para la detección de alteraciones genéticas. A continuación se describe paso a paso el protocolo para la preparación de los cromosomas propagación de células madre embrionarias humanas para controlar el estado cromosómico de estas células se mantienen en cultivo.
Abstract
Aunque las células madre embrionarias (células madre) se ha demostrado que presentan un cariotipo diploide estable 1, muchos estudios han reportado que en función de las condiciones de cultivo se convierten propensos a adquirir las anomalías cromosómicas como la suma de la totalidad o partes de los cromosomas. De hecho, durante el cultivo prolongado, alteraciones del cariotipo se observan cuando la disociación enzimática o química se utilizan 2,3,4, mientras que la disección manual de las colonias de pases conserva un cariotipo estable 5. Además, los cambios en el medio ambiente tales como la eliminación de las células de alimentación también parecen poner en peligro la integridad genética de las células madre a 3,6. Una vez que las alteraciones cromosómicas pueden afectar la fisiología celular, la caracterización de la integridad genética de las células madre in vitro células madre es esencial considerar como una herramienta esencial en los estudios de la embriogénesis y la prueba de la droga. Por otra parte, para el futuro con fines terapéuticos cambios cromosómicos son una preocupación real, ya que se asocia frecuentemente a la carcinogénesis.
Aquí mostramos un método sencillo y útil para obtener alta calidad se extiende cromosoma para su posterior análisis del cromosoma establecidos por bandas G, FISH, SKY o técnicas de CGH 7,8. Se recomienda comprobar el estado cromosómico de rutina, con intervalos de 5 pasajes a fin de vigilar la aparición de las translocaciones y aneuploidías
Priscila Britto y Sartore Rafaela contribuido igualmente a la de papel.
Protocol
Discussion
La preparación de los diferenciales de los cromosomas es un paso crítico para el éxito de un análisis de la situación genética de las células madre embrionarias mediante técnicas de rutina como el G-bandas, y las técnicas más sofisticadas como el pescado, SKY y CGH.
Este procedimiento se puede aplicar a muchos tipos de células, variando el período de incubación colcemid, que depende de la duración del ciclo celular. Para las colonias de células madre embrionarias, que esperar …
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 15 ml centrifuge tube | TPP | 91015 | ||
| Colcemid Karyo MAX | Gibco | 15212-012 | ||
| EDTA | Isofar | 721 | ||
| Glacial acetic acid | Isofar | 100 | ||
| Methanol | Isofar | 208 | ||
| Potassium Chloride (KCl) | Merck | 104.931.000 | ||
| Slide | Bioslide | 7105-1 | ||
| Tripsin | SIGMA | T4799 |
References
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