जमा एक कुशल अनुपूरक के रूप में मानव प्लेटलेट (pHPL) पशु सीरम मुक्त मानव स्टेम सेल संस्कृतियों के लिए lysate की तैयारी
Summary
मानव प्लेटलेट lysate वृद्धि कारकों की एक समृद्ध स्रोत और सेल संस्कृति में एक शक्तिशाली पूरक है. इस प्रोटोकॉल प्लेटलेट अमीर प्लाज्मा से शुरू, कई फ्रीज पिघलना चक्र प्रदर्शन और प्लेटलेट टुकड़े घट द्वारा मानव प्लेटलेट lysate का एक बड़ा पूल तैयार करने की प्रक्रिया को प्रस्तुत करता है.
Abstract
प्लेटलेट व्युत्पन्न वृद्धि कारक सेल प्रसार कुशलता को प्रोत्साहित करने के लिए दिखाया गया है<em> Vivo में</em<sup1,2></sup> और<em> इन विट्रो में</em>. इस आशय थ्रोम्बिन द्वारा सक्रिय प्लेटलेट्स के साथ mesenchymal stromal कोशिकाओं (MSCs), fibroblasts और endothelial बनाने – कॉलोनी कोशिकाओं के लिए रिपोर्ट किया गया है<sup3-5></sup> या फ्रीज / पिघलना चक्र द्वारा lysed<sup6-14></sup> पहले प्लेटलेट releasate सेल संस्कृति माध्यम से जोड़ा जाता है. प्लेटलेट व्युत्पन्न वृद्धि कारकों की पौष्टिकता प्रभाव ऊतक इंजीनियरिंग और पुनर्योजी चिकित्सा के लिए पहले से ही कई परीक्षणों में परीक्षण किया गया है.<sup1,15-17></sup> परिवर्तनीय दक्षता के लिए भाग में कम से कम वृद्धि कारकों की व्यक्तिगत मुक़्तलिफ़ सांद्रता के कारण माना जाता है<sup18,19></sup> और प्लेटलेट तैयार करने के लिए मानकीकृत प्रोटोकॉल के एक वर्तमान की कमी है.<sup15,16></sup> यह प्रोटोकॉल एक साध्य प्रक्रिया मानव प्लेटलेट lysate (pHPL) चालीस पचास एकल रक्त दान की नियमित उत्पादन प्लेटलेट अमीर प्लाज्मा (पीआरपी) से व्युत्पन्न का एक पूल उत्पन्न प्रस्तुत करता है. कई / फ्रीज पिघलना चक्र प्लेटलेट झिल्ली क्षतिग्रस्त कर रहे हैं और वृद्धि कारकों कुशलता से प्लाज्मा में जारी किए हैं. अंत में, प्लेटलेट टुकड़े के लिए व्यापक कुल गठन से बचने और संभावित प्रतिजनों खलाना centrifugation द्वारा हटा रहे हैं. मानक संस्कृति प्रोटोकॉल में pHPL के कार्यान्वयन के एक पशु प्रोटीन से मुक्त प्रणाली में प्रचारित सेल चिकित्सा विज्ञान के आगे विकास के लिए एक आशाजनक उपकरण का प्रतिनिधित्व करता है.
Protocol
Discussion
कुछ क्षेत्रों में प्लेटलेट अमीर प्लाज्मा (पीआरपी) buffy कोट अन्यथा पैक परीक्षण रक्त दान (चित्रा 1) से लाल रक्त कोशिका के उत्पादन की बर्बादी उत्पाद से प्राप्त किया जा सकता है. बेहतर, पीआरपी तुरंत pHPL के आगे की त…
Acknowledgements
यह काम ऑस्ट्रिया रिसर्च फाउंडेशन (FWF, अनुदान डी एस के लिए N211 – नेन) और ऑस्ट्रिया अनुसंधान संवर्धन एजेंसी (FFG, अनुदान डी एस के लिए N200) द्वारा समर्थित किया गया. लेखकों के उत्कृष्ट तकनीकी और भाषाई संपादन के लिए सहायता मोनिका Farrell के लिए क्लौडिया यूआरएल धन्यवाद.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Double bag (2 x 3.5L) | MacoPharma | VDL 8000XQ | originally for ascites puncture | |
| 50 mL Falcon tube | Falcon BD | 2098 | ||
| 50 mL Stripettes | Costar | 4501 | ||
| Plasma bags (600mL) | Baxter | R4R2021 | ||
| Sterile tubing welder | Terumo | TSCD-II | ||
| Welding equipment | Fresenius Kabi | Compo Seal | ||
| Water bath | ||||
| Sterile scissors | ||||
| Clamps | ||||
| Centrifuge |
References
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