Lysate טסיות הדם האנושי הוא מקור עשיר של גורמי גדילה תוסף חזק בתרבות התא. פרוטוקול זה מציג את תהליך הכנת מאגר גדול של lysate הטסיות על ידי אנוש החל פלזמה עשירה בטסיות, ביצוע מספר להקפיא להפשיר מחזורים depleting שברי הטסיות.
טסיות דם גורמי גדילה שמקורם הוכחו לעורר התפשטות תאים ביעילות<em> In vivo</em<sup> 1,2</sup> ו<em> במבחנה</em>. השפעה זו דווחה עבור תאים סטרומה mesenchymal (MSCs), fibroblasts ו אנדותל מושבת תאים יוצרי עם טסיות מופעל על ידי תרומבין<sup> 3-5</sup> או lysed על ידי הקפאה / הפשרה מחזורי<sup> 6-14</sup> לפני releasate טסיות מתווסף במדיום תרבית תאים. האפקט trophic של טסיות גורמי גדילה נגזר כבר נוסתה בניסויים מספר הנדסת רקמות וטיפול רגנרטיבית.<sup> 1,15-17</sup> יעילות משתנה נחשב לפחות בחלקה בשל ריכוזי מסתעף פרטני של גורמי גדילה<sup> 18,19</sup> וחוסר הנוכחי של פרוטוקולים סטנדרטיים להכנת טסיות.<sup> 15,16</sup> פרוטוקול זה מציג תהליך מעשי לייצר מאגר של lysate טסיות הדם האנושי (pHPL) נגזר פלזמה המיוצר באופן שגרתי עשיר בטסיות (PRP) של 40-50 תרומות דם אחת. על ידי הקפאה / הפשרה מחזורים כמה ממברנות טסיות ניזוקים גורמי גדילה משתחררים ביעילות לתוך הפלזמה. לבסוף, שברי טסיות יוסרו על ידי צנטריפוגה כדי למנוע היווצרות מצטבר רב לרוקן אנטיגנים פוטנציאליים. יישום pHPL לתוך תרבות פרוטוקולים סטנדרטיים מהווה כלי מבטיח עבור פיתוח נוסף של הרפוי תא מופצות בבעל חיים חלבון ללא המערכת.
באזורים מסוימים טסיות דם עשיר פלזמה (PRP) ניתן לקבל אצל באפי, מעילים אחרת שהוא תוצר פסולת של ארז ייצור תאים דם אדומים מתרומות דם שנבדקו (איור 1). באופן אופטימלי, PRP משמש מיד להכנת נוספת של pHPL, כמו טסיות מיושן מרכזת את הזמינות של גורמי גדילה עשוי להיות מופחת בשל נגעים אחסון ?…
עבודה זו נתמכה על ידי קרן המחקר האוסטרי (FWF, מענק N211-NAN ל DS) לבין מחקר אוסטרי קידום הסוכנות (FFG, מענק N200 ל DS). המחברים מודים Url קלאודיה לקבלת סיוע טכני מעולה מוניקה פארל לעריכה לשונית.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Double bag (2 x 3.5L) | MacoPharma | VDL 8000XQ | originally for ascites puncture | |
50 mL Falcon tube | Falcon BD | 2098 | ||
50 mL Stripettes | Costar | 4501 | ||
Plasma bags (600mL) | Baxter | R4R2021 | ||
Sterile tubing welder | Terumo | TSCD-II | ||
Welding equipment | Fresenius Kabi | Compo Seal | ||
Water bath | ||||
Sterile scissors | ||||
Clamps | ||||
Centrifuge |