Menselijke bloedplaatjes lysaat is een rijke bron van groeifactoren en een krachtig supplement in celcultuur. Dit protocol bevat het proces van het opstellen van een grote pool van de menselijke bloedplaatjes lysaat door uit te gaan van de bloedplaatjes rijk plasma, het uitvoeren van een aantal vries-dooi cycli en uitputting van de bloedplaatjes fragmenten.
Bloedplaatjes afgeleide groeifactoren is aangetoond dat celproliferatie efficiënt te stimuleren<em> In vivo</em<sup> 1,2</sup> En<em> In vitro</em>. Dit effect is gemeld voor mesenchymale stromale cellen (MSC's), fibroblasten en endotheelcellen kolonievormende cellen met bloedplaatjes geactiveerd door trombine<sup> 3-5</sup> Of gelyseerd door vries / dooi cycli<sup> 6-14</sup> Voordat de bloedplaatjes releasate wordt toegevoegd aan de celkweek medium. De trofische werking van bloedplaatjes afgeleide groeifactoren is al getest in een aantal trials voor tissue engineering en regeneratieve therapie.<sup> 1,15-17</sup> Wisselende efficiency wordt beschouwd als ten minste gedeeltelijk te wijten aan individueel afwijkende concentraties van groeifactoren<sup> 18,19</sup> En een huidige gebrek aan gestandaardiseerde protocollen voor bloedplaatjes voorbereiding.<sup> 15,16</sup> Dit protocol bevat een uitvoerbare procedure om een pool van menselijke bloedplaatjes lysaat (pHPL), afkomstig van routinematig geproduceerd bloedplaatjes rijk plasma (PRP) van veertig tot vijftig enkele bloeddonaties te genereren. Door verschillende vries / dooi cycli van de bloedplaatjes membranen zijn beschadigd en groeifactoren worden efficiënt uitgescheiden in het plasma. Ten slotte worden de bloedplaatjes fragmenten verwijderd door centrifugatie tot uitgebreide aggregaat vorming te vermijden en uitputten potentiële antigenen. De implementatie van pHPL in standaard cultuur-protocollen is een veelbelovend instrument voor de verdere ontwikkeling van de Cell Therapeutics gekweekt in een dierlijk eiwit-vrij systeem.
In sommige regio's bloedplaatjes rijk plasma (PRP) kan worden verkregen bij buffy-jassen anderszins een afvalproduct van verpakte productie van rode bloedcellen uit donorbloed getest (figuur 1). Optimaal wordt PRP onmiddellijk wordt gebruikt voor de verdere voorbereiding van pHPL, zoals in verouderde bloedplaatjes concentreert de beschikbaarheid van groeifactoren kunnen als gevolg van bloedplaatjes opslag laesies en de afbraak 20 worden verminderd. Verder is het aan te raden om PRP te produceren door het …
Dit werk werd ondersteund door de Oostenrijkse Research Foundation (FWF, subsidie N211-NAN naar de DS) en de Oostenrijkse Research Promotion Agency (FFG verlenen N200 naar de DS). De auteurs danken Claudia Url voor een uitstekende technische bijstand en Monica Farrell voor vertalers.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Double bag (2 x 3.5L) | MacoPharma | VDL 8000XQ | originally for ascites puncture | |
50 mL Falcon tube | Falcon BD | 2098 | ||
50 mL Stripettes | Costar | 4501 | ||
Plasma bags (600mL) | Baxter | R4R2021 | ||
Sterile tubing welder | Terumo | TSCD-II | ||
Welding equipment | Fresenius Kabi | Compo Seal | ||
Water bath | ||||
Sterile scissors | ||||
Clamps | ||||
Centrifuge |