혈소판 유착 계단식는 전단 흐름의 존재에서 일어나는, 요인은 종래의 (정적) 잘 철판 assays에서 차지하는 없습니다. 이 문서의 생리 전단 흐름 조건을 에뮬레이트하는 microfluidic 잘 플레이트 형식을 이용한 혈소판 – 집계 분석에 대한 보고서.
혈소판 응집은 내피 아래의 세포외 기질이 노출되었습니다 혈관 손상에 대한 응답으로 발생합니다. 혈소판 유착 계단식는 전단 흐름의 존재에서 일어나는, 요인은 종래의 (정적) 잘 철판 assays에서 차지하는 없습니다. 이 문서의 생리 전단 흐름 조건을 에뮬레이트하는 microfluidic 잘 플레이트 형식을 이용한 혈소판 – 집계 분석에 대한 보고서. 세포외 단백질, 콜라겐 I 또는 폰 Willebrand 인자는 공기 펌프와 적극적인 재관류를 사용하여 microfluidic 채널 내에 입금됩니다. 매트릭스 단백질은 다음 버퍼로 세탁 및 혈소판 상호 작용에 대한 microfluidic 채널을 준비하는 차단됩니다. 형광 염료로 분류 전체 혈액은 혈소판 활성화 및 집계를 달성하기 위해 다양한 유량에서 채널을 통해 perfused입니다. 혈소판 응집 억제제는 IC50의 선량 응답 데이터를 생성하는 흐름 세포 실험 이전에 추가할 수 있습니다.
여기에 방법이 특정 세포외 기질 단백질과 혈소판 집합의 특정 억제제를 사용하여 제시하는 동안, 프로토콜은 다른 코팅 다른 세포 종류와 세포 유착 assays 다른 억제제로 확장됩니다. 이러한 실험의 성공의 핵심 요소는 모든 시약에 대한 microfluidic 채널, 올바른 diluents의 모든 시약의 정확한 희석하고, 적절한 배양 조건에서 거품의 소지를 없애기 있습니다.
The authors have nothing to disclose.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
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collagen I, Bovine | Reagent | Invitrogen | A1064401 | other sources of collagen I can be used |
PBS plus Ca/Mg | Reagent | Invitrogen | 14040-117 | |
Bovine serum albumin (BSA) | Reagent | EMD | EM-2930 Bottom of Form | From VWR |
calcein AM | Reagent | Invitrogen | C1430 | Calcein AM from BD can also be used |
BioFlux 1000 System | Reagent | Fluxion Biosciences | Contact Company | |
BioFlux Plate | Reagent | Fluxion Biosciences | 900013 | |
antiGPIIb/IIIa | Reagent | Abcam | ab33407 | an alternative # is ab15021 |
ReoPro | Reagent | Eli Lilly | by Rx only |