وصفنا بروتوكول مبسط لتوليد "فيليه" الاستعدادات للأجنة ذبابة الفاكهة من المورثات المحددة. هذا البروتوكول يسمح التنفيذ الفعال لمجموعة متنوعة من شاشات الجينية. كما يسمح التصور ممتازة الهياكل في الجنين في وقت متأخر.
Abstract
يمكن أجنة ذبابة الفاكهة بين 14 و 17 مراحل من التطور الجنيني تشريح بسهولة لتوليد "فيليه" الاستعدادات. في هذه الاستعدادات ، والنظام العصبي المركزي يعمل في منتصف أسفل ، ويحيط بها جدران الجسم. وقد تم فحص الظواهر المختلفة باستخدام العديد من هذه التحضيرات. في معظم الحالات ، كانت ولدت من قبل شرائح تشريح جسم الملطخة الأجنة كلها جبل ثابت. هذه "تشريح الثابتة" لدينا بعض العيوب ، ولكن. فهي تستغرق وقتا طويلا للتنفيذ ، وأنه من الصعب فرز متحولة (GFP سلبية) الأجنة من المخزونات التي يحتفظ بها في أكثر من طفرات الكروموسومات موازن GFP. منذ عام 2002 ، تم إجراء مجموعتنا عوز وشاشات التعبير خارج الرحم لتحديد يغاندس لمستقبلات اليتيم. طورنا من أجل القيام بذلك ، وبروتوكولات مبسطة لتشريح الجنين يعيش وتلوين الأجسام المضادة للمجموعات التي تحتوي على مئات من خطوط متوازنة. لقد استنتجنا أنه أكثر كفاءة بكثير لدراسة الظواهر في مجموعات كبيرة من الاسهم عن طريق تشريح حية من قبل تشريح الثابتة. باستخدام بروتوكول صفها هنا ، يمكن لفرد واحد المدربين الشاشة تصل إلى 10 خطا لكل يوم لمدة الظواهر ، ودراسة الأجنة 4-7 متحولة من كل سطر تحت المجهر المركب. وهذا يسمح بتحديد الطفرات منح خفية ، منخفضة انتفاذ الظواهر ، حيث يتم تسجيل ما يصل إلى 70 في كل سطر في hemisegments التكبير مع عدسة عالية للمياه الغمر 40X.
Protocol
مقدمة يمكن أجنة ذبابة الفاكهة بين 14 و 17 مراحل من التطور الجنيني تشريح بسهولة لتوليد "فيليه" الاستعدادات. في هذه الاستعدادات ، والجهاز العصبي المركزي (CNS) يعمل باستمرار على المتوسط ، وتحيط بها جدران الجسم. تتم إزالة الأ?…
Discussion
نأمل أن تكون هذه التظاهرة عرض الفيديو وأساليبنا لتشريح الجنين يعيش وتلطيخ بتفصيل كاف أنه يمكن الآن أن يتم تنفيذها بسهولة من قبل أي شخص لديه بعض الخبرة في مجال علم الوراثة وعلم الأجنة ذبابة الفاكهة. بالطبع ، لا يزال كبيرا الممارسة يكون مطلوبا ، في المقام الأول لت?…
Acknowledgements
نشكر نيكي فوكس وشميد ألويزيا لمساهماتها في تطوير هذه البروتوكولات. وأيد هذا العمل عن طريق منحة المعاهد الوطنية للصحة لRO1 KZ ، NS28182.
Lee, H. (., Wright, A. P., Zinn, K. Live Dissection of Drosophila Embryos: Streamlined Methods for Screening Mutant Collections by Antibody Staining. J. Vis. Exp. (34), e1647, doi:10.3791/1647 (2009).