En Multi-parametriska Islet Perifusion System inom en mikroflödessystem Perifusion enhet

Summary

En mikroflödessystem holme perifusion enhet har utvecklats för bedömning av dynamiska insulinsekretionen av flera holmar och samtidiga fluorescens avbildning av kalciuminflödet och mitokondrie eventuella förändringar.

Abstract

En mikroflödessystem holme perifusion enhet har utvecklats för bedömning av dynamiska insulinsekretionen av flera holmar och samtidiga fluorescens avbildning av kalciuminflödet och mitokondrie eventuella förändringar. Enheten består av tre lager: för det första lagret innehåller en rad mikroskala brunnar (500 ìm diameter och 150 ìm djup) som bidrar till att immobilisera kobbar och samtidigt utsätts för flödet och maximera den exponerade ytan av holmar, den andra lagret innehåller en cirkulär perifusion kammare (3 mm djup, 7 mm i diameter) och den tredje lagret innehåller en vik-blandning kanal som fans innan injektion i perifusion kammare (2 mm bred, 19 mm i längd och 500 mikrometer i höjd) för att optimera blandning effektivitet före inträde i perifusion kammaren. Skapandet av olika glukos gradienter, inklusive en linjär, klocka form och kvadratiska former kan också skapas i mikroflödessystem perifusion nätverket och demonstreras.

Protocol

A. mikrofabrikation av 3-lagers mikroflödessystem perifusion enhet Botten Väl Mästare Protocol (150 ìm djupa brunnar) Rengör skivan med ett rakblad om det behövs. Rengör med aceton, metanol, och IPA. Utför plasma behandling med 50 watt för 30 s. Spin SU8-100 @ 2000 rpm. [Steg 1: 500 rpm, 10 s, 100 varv / s, Steg 2: 2000 rpm, 30 s, 300 varv / s]. [OBS! Inte håller skivan med pincett efter spinning SU8] Mjuk baka rånet vid 65 ° C i 20 minuter och …

Discussion

Traditionella holme perifusion system (makroskala och mikroskala) har vissa begränsningar, inklusive komplex av installation och design, höga tekniska krav och svårigheter att skapa användardefinierade föreskrivna kemiska gradienter i systemet. Den mikroflödessystem perifusion som beskrivs här övervinner dessa begränsningar med enkla geometrin för design och tillverkning. Viktigare, kan detta system integreras med fluorescens avbildningsteknik som ger ett unikt verktyg för att studera holme fysiologi. Systeme…

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
60ml Syringes		BD
Fura-2 fluorescence dye		Molecular Probes Inc.
Rhodamine123 Fluorescence dye		Molecular Probes Inc.
Glucose		Sigma
Bovine Serum Albumin		Sigma
30″ Silicone tubings		Cole Palmer		1/16 x 1/8in
1.5ml Eppendorf tubes		Fisher
Y-connectors		Cole Palmer		1/16” & 4mm
Syringe connectors		Cole Palmer		female luer plug 1/16”
Straight connectors		Cole Palmer		1/16”
Elbow connector		Cole Palmer		1/16”
Havard syringe pump		Harvard Apparatus
Perifusion device
Hot plate		PMC
Thermometer		Omega Engineering Inc.
Fraction collector		Gibson
Pippettor		Fisher
Inverted epiflorescence microscope		Olympus	IX71
Charge-coupled device		QImaging		Retiga-SRV, Fast 1394