Пресинаптически Тихая Синапсы Учился с световой микроскопии
Summary
Глутаматергической синапсов может переключаться с активного режима в режим без звука. Мы показываем, что пресинаптические статус активности в культуре диссоциированных нейронов грызунов визуализируется использованием поправимо форме FM1-43 красителя для визуализации активных синапсов и иммуноокрашивания с vGluT-1 антител визуализировать все глутамата синапсов.
Abstract
Синаптической пластичности вероятно, лежит в основе способности нервной системы, чтобы узнать и запомнить, а также может представлять приспособляемости, который предотвращает повреждения в противном случае оскорбления стать нейротоксическое. Мы изучали форму пресинаптической пластичности что интересно отчасти потому, что выражается в виде цифровых включение и выключение способности пресинаптических терминал с выпустить пузырьки содержащей нейромедиатора глутамата. Здесь показано, протокол для визуализации статуса активности пресинаптических терминалах в диссоциированных культурах клеток получают из грызунов гиппокампе. Метод основан на выявлении активных синапсов использованием окрашивания поправимо форме стирил красителя FM1-43, который обычно используется для обозначения синаптических пузырьков. Это окрашивание профиля по сравнению с иммунной одного и того же терминалы с антителами, направленными против везикулярного транспортера глутамата 1 (vGluT-1), пятна, направленных на этикетке все глутамата синапсов, независимо от состояния активации. Мы считаем, что деполяризующего раздражители вызывают пресинаптических глушителей. Население синапсов, в котором отсутствуют в исходных условий могут быть активированы длительной электрической заставить замолчать или путем активации цАМФ сигнальных путей.
Protocol
Discussion
Значение
- Обычно синапсов, как считается, работают, выпуская передатчик с измеримые вероятности. Работа по себе и другим, делает очевидным тот факт, что некоторые синапсы к выпуску огнеупорных нейромедиатор, несмотря на полный комплект везикулярного транспортера нейротрансмитте…
Acknowledgements
Эта работа была поддержана грантами NIH DA018109 и MH78823 и NIH Neuroscience Blueprint Основные Грант P30NS057105 в Вашингтонском университете.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| FM1-43FX | Invitrogen | F-35355 | A red-shifted FM4-64FX is also available, but has not proven as amenable to assays of presynaptic silencing. | |
| Advasep-7 | CyDex | AR-0A7-001 | ||
| vGluT-1 | Millipore | AB5905 | ||
| Alexa 647-conjugated anti-GP | Invitrogen | A-21450 | ||
| Fluoromount-G | Southern Biotechnology Associates | 0100-01 |
References
- Mennerick, S., Que, J., Benz, A., Zorumski, C. F. Passive and synaptic properties of hippocampal neurons grown in microcultures and in mass cultures. J. Neurophysiol. 73, 320-332 (1995).
- Moulder, K. L., Jiang, X., Taylor, A. A., Olney, J. W., Mennerick, S. Physiological activity depresses synaptic function through an effect on vesicle priming. J. Neurosci. 26, 6618-6626 (2006).
- Moulder, K. L., Jiang, X., Chang, C., Taylor, A. A., Benz, A. M., Conti, A. C., Muglia, L. J., Mennerick, S. A specific role for Ca2+-dependent adenylyl cyclases in recovery from adaptive presynaptic silencing. J. Neurosci. 28, 5159-5168 (2008).
- Sara, Y., Mozhayeva, M. G., Liu, X., Kavalali, E. T. Fast vesicle recycling supports neurotransmission during sustained stimulation at hippocampal synapses. J. Neurosci. 22, 1608-1617 (2002).
- Kay, A. R., Alfonso, A., Alford, S., Cline, H. T., Holgado, A. M., Sakmann, B., Snitsarev, V. A., Stricker, T. P., Takahashi, M., Wu, L. G. Imaging synaptic activity in intact brain and slices with FM1-43 in C. elegans, lamprey, and rat. Neuron. 24, 809-817 (1999).
- Rosenmund, C., Sigler, A., Augustin, I., Reim, K., Brose, N., Rhee, J. S. Differential control of vesicle priming and short-term plasticity by Munc13 isoforms. Neuron. 33, 411-424 (2002).
- Altrock, W. D., tom Dieck, S., Sokolov, M., Meyer, A. C., Sigler, A., Brakebusch, C., Fassler, R., Richter, K., Boeckers, T. M., Potschka, H., Brandt, C., Loscher, W., Grimberg, D., Dresbach, T., Hempelmann, A., Hassan, H., Balschun, D., Frey, J. U., Brandstatter, J. H., Garner, C. C., Rosenmund, C., Gundelfinger, E. D. Functional inactivation of a fraction of excitatory synapses in mice deficient for the active zone protein bassoon. Neuron. 37, 787-800 (2003).
- Ting, J. T., Kelley, B. G., Lambert, T. J., Cook, D. G., Sullivan, J. M. Amyloid precursor protein overexpression depresses excitatory transmission through both presynaptic and postsynaptic mechanisms. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 104, 353-348 (2007).
