Presynaptically साइलेंट लाइट माइक्रोस्कोपी के साथ पढ़ाई synapses
Summary
Glutamatergic synapses एक सक्रिय मोड से एक मूक मोड के लिए स्विच कर सकते हैं. हम कृंतक न्यूरॉन्स की अलग संस्कृति में है कि presynaptic गतिविधि स्थिति प्रदर्शित FM1 43 डाई की एक fixable फार्म का उपयोग करने के लिए सक्रिय synapses कल्पना और vGluT-1 प्रतिपिण्ड के साथ immunostaining सभी ग्लूटामेट synapses कल्पना कल्पना है.
Abstract
Synaptic plasticity की संभावना तंत्रिका प्रणाली के लिए जानने के लिए और याद है और यह भी एक अनुकूलनशीलता है कि अन्यथा neurotoxic बनने से हानिकारक अपमान रोकता का प्रतिनिधित्व कर सकते करने की क्षमता underlies. हम presynaptic plasticity है कि हिस्से में दिलचस्प है की एक फार्म अध्ययन कर रहा है क्योंकि यह एक presynaptic एस टर्मिनल neurotransmitter ग्लूटामेट युक्त vesicles रिलीज करने की क्षमता का एक डिजिटल स्विचन और बंद के रूप में व्यक्त किया है. यहाँ हम कृंतक हिप्पोकैम्पस से तैयार dissociated सेल संस्कृतियों में presynaptic टर्मिनलों की गतिविधि स्थिति visualizing के लिए एक प्रोटोकॉल का प्रदर्शन. विधि सक्रिय styryl डाई की एक fixable फार्म FM1 43, सामान्यतः synaptic vesicles के लेबल के लिए प्रयोग किया जाता के साथ धुंधला हो जाना का उपयोग synapses का पता लगाने पर निर्भर करता है है. यह धुंधला हो जाना प्रोफ़ाइल vesicular ग्लूटामेट 1 ट्रांसपोर्टर (vGluT 1), सभी ग्लूटामेट synapses सक्रियण स्थिति की परवाह किए बिना लेबल के लिए डिजाइन दाग के खिलाफ निर्देशित एंटीबॉडी के साथ एक ही टर्मिनलों के immunostaining के साथ तुलना में है. हम पाते हैं कि depolarizing उत्तेजनाओं presynaptic मुंह बंद प्रेरित. synapses कि आधारभूत शर्तों के तहत चुप है की आबादी को लंबे समय तक बिजली के मुंह बंद करने से या शिविर संकेत दे रास्ते के सक्रियण द्वारा सक्रिय किया जा सकता है.
Protocol
Discussion
महत्व
- आमतौर पर synapses के लिए एक औसत दर्जे संभावना के साथ ट्रांसमीटर को रिहा द्वारा संचालित लगा रहे हैं. खुद को और दूसरों के द्वारा कार्य यह स्पष्ट करता है कि कुछ synapses neurotransmitter को रिहा करने के लिए आग रोक रहे ह…
Acknowledgements
इस काम NIH DA018109 अनुदान और MH78823, और वाशिंगटन विश्वविद्यालय के NIH न्यूरोसाइंस खाका कोर अनुदान P30NS057105 द्वारा समर्थित किया गया था.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| FM1-43FX | Invitrogen | F-35355 | A red-shifted FM4-64FX is also available, but has not proven as amenable to assays of presynaptic silencing. | |
| Advasep-7 | CyDex | AR-0A7-001 | ||
| vGluT-1 | Millipore | AB5905 | ||
| Alexa 647-conjugated anti-GP | Invitrogen | A-21450 | ||
| Fluoromount-G | Southern Biotechnology Associates | 0100-01 |
References
- Mennerick, S., Que, J., Benz, A., Zorumski, C. F. Passive and synaptic properties of hippocampal neurons grown in microcultures and in mass cultures. J. Neurophysiol. 73, 320-332 (1995).
- Moulder, K. L., Jiang, X., Taylor, A. A., Olney, J. W., Mennerick, S. Physiological activity depresses synaptic function through an effect on vesicle priming. J. Neurosci. 26, 6618-6626 (2006).
- Moulder, K. L., Jiang, X., Chang, C., Taylor, A. A., Benz, A. M., Conti, A. C., Muglia, L. J., Mennerick, S. A specific role for Ca2+-dependent adenylyl cyclases in recovery from adaptive presynaptic silencing. J. Neurosci. 28, 5159-5168 (2008).
- Sara, Y., Mozhayeva, M. G., Liu, X., Kavalali, E. T. Fast vesicle recycling supports neurotransmission during sustained stimulation at hippocampal synapses. J. Neurosci. 22, 1608-1617 (2002).
- Kay, A. R., Alfonso, A., Alford, S., Cline, H. T., Holgado, A. M., Sakmann, B., Snitsarev, V. A., Stricker, T. P., Takahashi, M., Wu, L. G. Imaging synaptic activity in intact brain and slices with FM1-43 in C. elegans, lamprey, and rat. Neuron. 24, 809-817 (1999).
- Rosenmund, C., Sigler, A., Augustin, I., Reim, K., Brose, N., Rhee, J. S. Differential control of vesicle priming and short-term plasticity by Munc13 isoforms. Neuron. 33, 411-424 (2002).
- Altrock, W. D., tom Dieck, S., Sokolov, M., Meyer, A. C., Sigler, A., Brakebusch, C., Fassler, R., Richter, K., Boeckers, T. M., Potschka, H., Brandt, C., Loscher, W., Grimberg, D., Dresbach, T., Hempelmann, A., Hassan, H., Balschun, D., Frey, J. U., Brandstatter, J. H., Garner, C. C., Rosenmund, C., Gundelfinger, E. D. Functional inactivation of a fraction of excitatory synapses in mice deficient for the active zone protein bassoon. Neuron. 37, 787-800 (2003).
- Ting, J. T., Kelley, B. G., Lambert, T. J., Cook, D. G., Sullivan, J. M. Amyloid precursor protein overexpression depresses excitatory transmission through both presynaptic and postsynaptic mechanisms. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 104, 353-348 (2007).
