Präsynaptisch Stille Synapsen mit Lichtmikroskopie Studium
Summary
Glutamatergen Synapsen kann von einem aktiven Modus, um einen Silent-Modus wechseln. Wir zeigen, dass präsynaptische Aktivität Status in dissoziierten Kultur der Nager Neuronen visualisiert mit einem fixierbaren Form des FM1-43 Farbstoff aktiven Synapsen visualisieren und Immunfärbung mit vGluT-1-Antikörper, um alle Glutamat Synapsen zu visualisieren.
Abstract
Synaptische Plastizität wahrscheinlich liegt dem Nervensystem die Fähigkeit zu lernen und zu erinnern und auch stellen eine Anpassungsfähigkeit, die sonst verhindert eine Beschädigung Beleidigungen zu neurotoxischen. Wir haben das Studium eine Form der präsynaptischen Plastizität, die interessante Teil ist, weil es als digitale Ein-und Ausschalten eines präsynaptischen Terminal s Fähigkeit, Vesikel mit dem Neurotransmitter Glutamat-Ausschüttung zum Ausdruck kommt. Hier zeigen wir ein Protokoll für die Visualisierung der Aktivität Status der präsynaptischen in dissoziierten Zellkulturen aus dem Hippocampus Nagetier vorbereitet. Die Methode beruht auf der Erfassung aktiven Synapsen mit Färbung mit einem fixierbaren Form der Styryl-Farbstoff FM1-43, häufig verwendet, um synaptische Vesikel-Label. Diese Färbung Profil ist mit Immunfärbung des gleichen Terminals mit einem Antikörper gegen den vesikulären Glutamat-Transporter 1 (vGluT-1), eine Kennzeichnungspflicht aller Glutamat Synapsen unabhängig von Aktivierungsstatus konzipiert Fleck gerichtet verglichen. Wir finden, dass depolarisierende Stimuli präsynaptischen Schweigen zu induzieren. Die Bevölkerung von Synapsen, die still ist unter Baseline-Bedingungen können bei längerer elektrischen Schweigen oder durch Aktivierung des cAMP-Signalwege aktiviert werden.
Protocol
Discussion
Bedeutung
- Typischerweise Synapsen wird angenommen, dass durch die Freigabe Sender mit einem messbaren Wahrscheinlichkeit zu betreiben. Die Arbeit von uns selbst und andere macht es offensichtlich, dass einige Synapsen refraktär Freisetzung von Neurotransmittern sind, trotz einer vollständigen Ergänzung der vesikulären Neurotransmitter-Transporter und andere wichtige präsynaptischen Marker 2, 6-8. Wir haben bereits, dass die basalen Netzwerk-Aktivität in Neuronen entscheidend für diese Bevöl…
Acknowledgements
Diese Arbeit wurde vom NIH gewährt DA018109 und MH78823 und NIH Neuroscience Blueprint Core-Stipendium P30NS057105 zu Washington University unterstützt.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| FM1-43FX | Invitrogen | F-35355 | A red-shifted FM4-64FX is also available, but has not proven as amenable to assays of presynaptic silencing. | |
| Advasep-7 | CyDex | AR-0A7-001 | ||
| vGluT-1 | Millipore | AB5905 | ||
| Alexa 647-conjugated anti-GP | Invitrogen | A-21450 | ||
| Fluoromount-G | Southern Biotechnology Associates | 0100-01 |
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