تسجيلات شفط وحيدة الخلية المستقبلة من المخروط ماوس
Summary
وسوف نظهر كيف يمكن تسجيل ردود فلاش من المخاريط ماوس واحدة باستخدام القطب الشفط.
Abstract
وقضيب مبصرات مخروط في شبكية العين هي المسؤولة عن الكشف عن الضوء. في الظلام ، ودوري النوكليوتيدات بوابات (CNG) القنوات في الجزء الخارجي مفتوحة وتسمح باستمرار تدفق الكاتيونات إلى الداخل عبر الغشاء ، depolarizing الخلية. التعرض للضوء مشغلات إغلاق قنوات الغاز الطبيعي المضغوط ، وكتل التدفق الداخل الموجبة الحالية ، وبالتالي يؤدي إلى فرط الاستقطاب الخلية. استنادا إلى قطبية مبصرات ، تم تطوير طريقة تسجيل الشفط في 1970s أنه ، خلافا للأسلوب الكلاسيكي التصحيح ، المشبك ، لا يتطلب اختراق غشاء البلازما<sup> 1</sup>. الرسم الجزء الخارجي إلى ماصة الزجاج بإحكام تركيب مليئة حل خارج الخلية يسمح بتسجيل التغيرات الحالية في الخلايا الفردية عند التعرض للتجارب فلاش. ومع ذلك ، هذا الراسخة "، الجزء الخارجي في (OS في)" تسجيل الشفط ليست مناسبة لتسجيلات مخروط الماوس ، وذلك بسبب انخفاض النسبة المئوية للالمخاريط في شبكية العين الماوس (3 ٪) ، والصعوبات في تحديد مخروط شرائح الخارجي. مؤخرا ، تم تطويره على قطعة داخلية ، في (IS – في) تسجيل التكوين أن يوجه الجزء الداخلي / المنطقة النووية لمبصرة في تسجيل ماصة<sup> 2،3</sup>. في هذا الفيديو ، وسوف نعرض كيفية تسجيل من الفردية photoresponses المخروط باستخدام الماوس وحيدة الخلية الكهربائي الشفط.
Protocol
Discussion
وقد وضعت وحيدة الخلية تسجيل الشفط من خلايا مستقبلة للضوء 3 عقود مضت. انها تمكننا من تسجيل عبر غشاء تغيير الحالي الناجم عن ضوء التحفيز دون اختراق غشاء الخلية. بسبب التصاق الخلية خلية عالية ، وأنه من الصعب عزل قضيب واحد صحي والمخروط من شبكية العين شبكية العين مثل الماوس …
Acknowledgements
بدعم من جائزة التطوير المهني من البحوث للوقاية من العمى ، المعاهد الوطنية للصحة منح EY 019312 ، ومنح غير مقيدة من البحوث للوقاية من العمى وEY 02687 (قسم علوم طب وجراحة العيون والبصرية في جامعة واشنطن).
References
- Yau, K. W., Lamb, T. D., Baylor, D. A. Light-induced fluctuations in membrane current of single toad rod outer segments. Nature. 269, 78-80 (1977).
- Nikonov, S. S. Photoreceptors of Nrl -/- mice coexpress functional S- and M-cone opsins having distinct inactivation mechanisms. J Gen Physiol. 125, 287-304 (2005).
- Nikonov, S. S., Kholodenko, R., Lem, J., Pugh, E. N. Physiological features of the S- and M-cone photoreceptors of wild-type mice from single-cell recordings. J Gen Physiol. 127, 359-374 (2006).
- Applebury, M. L. The murine cone photoreceptor: a single cone type expresses both S and M opsins with retinal spatial patterning. Neuron. 27, 513-523 (2000).
- Cornwall, M. C., Fein, A., MacNichol, E. F. Cellular mechanisms that underlie bleaching and background adaptation. J Gen Physiol. 96, 345-372 (1990).
- Calvert, P. D. Phototransduction in transgenic mice after targeted deletion of the rod transducin alpha -subunit. Proc Natl Acad Sci U S A. 97, 13913-13918 (2000).
