Nous allons montrer comment enregistrer les réponses flash à partir de cônes de souris en utilisant une électrode de succion.
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Article de méthode
Enregistrements aspiration simple cellule à partir de cônes photorécepteurs de la souris
Dans cet article
Résumé
Résumé
Photorécepteurs Rod et cônes dans la rétine sont responsables de la détection de lumière. Dans l'obscurité, des nucléotides cycliques-dépendants (CNG) des canaux dans le segment externe sont ouvertes et permettent aux flux de cations régulièrement vers l'intérieur à travers la membrane, dépolariser la cellule. Exposition à la lumière déclenche la fermeture des canaux CNG, bloque le flux cation courant entrant, et donc les résultats de l'hyperpolarisation cellulaire. Basé sur la polarité des photorécepteurs, une méthode d'enregistrement d'aspiration a été développé en 1970 que, contrairement à la classique technique de patch-clamp, ne nécessite pas de pénétrer la membrane plasmique
Protocole
Faire électrodes
- Faire les électrodes d'enregistrement à l'aide d'un tire-micropipette et polir les électrodes avec filament chauffant sous le microscope. Pour cône de la souris d'aspiration d'enregistrement unicellulaire, le diamètre intérieur de la pointe de l'électrode est d'environ um 6-7.
- Préparer des électrodes de référence. Peser agar à 1% dans de l'eau distillée. Faire fondre la solution d'agar dans le bain d'eau chaude. Remplissez les pipettes en verre (L = 100 mm, OD / ID = 1/0.75 mm) avec de l'agar à 1% en utilisant une seringue. Solidifier la gélose à la température ambiante pendant 10 minut....
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Discussion
L'enregistrement d'aspiration mono-cellulaire de cellules photoréceptrices a été développé il ya 3 décennies. Il nous permet d'enregistrer le changement trans-membranaire courant induit par une stimulation lumineuse sans pénétrer la membrane cellulaire. En raison de haute adhérence cellule-cellule, il est difficile d'isoler saine seule tige et le cône de la rétine de souris, comme la rétine des amphibiens et il est difficile de trouver des cônes individuels en raison de la faible pourcentage (3%) et de p.......
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Remerciements
Soutenu par le Prix de développement de carrière à partir de la recherche pour prévenir la cécité, NIH EY 019 312, et subvention sans restriction de la recherche pour prévenir la cécité et EY 02687 (Département d'ophtalmologie et de sciences visuelles à l'Université Washington).
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Références
- Yau, K. W., Lamb, T. D., Baylor, D. A. Light-induced fluctuations in membrane current of single toad rod outer segments. Nature. 269, 78-80 (1977).
- Nikonov, S. S. Photoreceptors of Nrl -/- mice coexpress functional S- and M-cone....
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Réimpressions et autorisations
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