الحصول على Hemocytes من الحبار قصير الذيل هاواي Euprymna scolopes مراقبة وتمسكهم البكتيريا التكافلية وغير التكافلية ،
Summary
وهذا الفيديو لشرح كيفية الحصول على hemocytes (خلايا الدم) من الحبار قصير الذيل في هاواي ،<em> Euprymna scolopes</em> للاستخدام في خلية التصاق المقايسات البيولوجية والجرثومية. وسوف يلطخ Hemocytes مع صبغة الفلورسنت ويتعرضون لGFP المسمى البكتيريا.
Abstract
الدراسات المتعلقة بدور جهاز المناعة في التوسط بين الإشارات الجزيئية البكتيريا النافعة ومضيفيهم ، في السنوات الأخيرة ، وقدمت مساهمات كبيرة لفهمنا لتطور المشترك للحقيقيات النوى مع مجهريات البقعة بهم. لعلاقة تكافلية بين الحبار قصير الذيل في هاواي ،<em> Euprymna scolopes</em> وبكتيريا bioluminescent<em> الضمة fischeri</em> وقد استخدمت كنظام نموذج لفهم آثار البكتيريا المفيدة حول التنمية الحيوانية. وقد أظهرت الدراسات الحديثة أن مثل بلعم hemocytes ، المكون الوحيد الخلوي للنظام المضيف الحبار المناعة الفطرية ، ولعب على الارجح دورا مهما في التوسط في إنشاء وصيانة هذه الجمعيات. وهذا البروتوكول لشرح كيفية الحصول على hemocytes من<em> E. scolopes</em> ومن ثم استخدام هذه الخلايا في المقايسات ملزمة البكتيرية. الكبار الحبار وتخدير لأول مرة أمام يتم جمعها بواسطة حقنة الدملمف من الاوعية الدموية الرأسية الرئيسية. يتم التقيد hemocytes المضيف ، الواردة في الدملمف المستخرج ، لcoverslips زجاج غرف ويتعرض بعد ذلك إلى اللون الأخضر التكافلية البروتين المسمى الفلورسنت<em> الضمة fischeri</em> وغير التكافلية ،<em> الضمة harveyi</em>. وcounterstained في hemocytes مع صبغة الفلورسنت (خلية المقتفي أورانج ، Invitrogen) ومن ثم تصور باستخدام المجهر الفلورسنت.
Protocol
Discussion
الدراسات المتعلقة بدور جهاز المناعة في التوسط بين الإشارات الجزيئية البكتيريا النافعة ومضيفيهم ، في السنوات الأخيرة ، وقدمت مساهمات كبيرة لفهمنا لتطور المشترك للحقيقيات النوى مع مجهريات البقعة بهم. وقد أثبت نظام الحبار / ضمة نفسها كنظام نموذج الانقياد للإجابة على ?…
Acknowledgements
مصادر التمويل : جامعة كونيتيكت مؤسسة البحوث وقسم البيولوجيا الجزيئية والخلوية لSVN ، سيغما شى غرانت في والمعونة من البحوث وH. R. انطونيو وMajorie
رومانو زمالة دراسات عليا التعليم لAJC
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Lab-Tek chambered #1.0 borosilicate coverglass system (8-chambers) | Thermo-Fisher Scientific | 155411 | ||
| 26.5 G 1ml latex-free insulin syringe | Becton, Dickinson and Company | C34551 | ||
| Cell Tracker Orange | Invitrogen | C34551 | ||
| SteREO Discovery V20 Microscope | Zeiss | |||
| SP2 Confocal Microscope | Leica |
References
- Koropatnick, T. A., Kimbell, J. R., McFall-Ngai, M. J. Responses of host hemocytes during the initiation of the squid-Vibrio symbiosis. Biol. Bull. 212, 29-39 (2007).
- McFall-Ngai, M. J. Unseen forces: the influence of bacteria on animal development. Dev. Biol. 242, 1-14 (2002).
- McFall-Ngai, M. J., Ruby, E. G. Symbiont recognition and subsequent morphogenesis as early events in an animal-bacterial mutualism. Science. 254, 1491-1494 (1991).
- Nyholm, S. V., Stewart, J. J., Ruby, E. G., McFall-Ngai, M. J. Recognition between symbiotic Vibrio fischeri and the haemocytes of Euprymna scolopes. Environ. Microbiol. 11, 483-493 (2009).
- Nyholm, S. V., McFall-Ngai, M. J. The winnowing: establishing the squid-Vibrio symbiosis. Nat. Rev. Microbiol. 2, 632-642 (2004).
- Nyholm, S. V., Stabb, E. V., Ruby, E. G., McFall-Ngai, M. J. Establishment of an animal-bacterial association: recruiting symbiotic Vibrios from the environment. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 97, 10231-10235 (2000).
- Nyholm, S. V., McFall-Ngai, M. J. Sampling the light-organ microenvironment of Euprymna scolopes: description of a population of host cells in association with the bacterial symbiont Vibrio fischeri. Biol Bull. 195, 89-97 (1998).
- Visick, K. L., Ruby, E. G. Vibrio fischeri and its host: it takes two to tango. Curr. Opin. Microbiol. 9, 632-638 (2006).
