إعداد يسحق ذبابة الفاكهة كروموسوم كثور الخيوط الصبغية للجسم وصفها
Summary
هذا البروتوكول فيديو يوضح تقنية الاسكواش المستخدمة في المختبر لإعداد يوهانسن<em> ذبابة الفاكهة</em> الكروموسومات كثور الخيوط الصبغية لوصفها الأضداد.
Abstract
وقد تم منذ فترة طويلة ذبابة الفاكهة المفضلة لنظام نموذجي لدراسة العلاقة بين لونين وتنظيم بنية الجينات بسبب المزايا التي يقدمها الخلوي العملاقة اللعابية الكروموسومات كثور الخيوط الصبغية الغدة اليرقات طور مرحلي الثالثة. في هذا النسيج الكروموسومات الخضوع عدة جولات من تكرارها في حال عدم وجود انقسام الخلايا مما يؤدي إلى حوالي 1000 نسخة. الحمض النووي لا يزال الانحياز بعد كل دورة تنسخي مما أدى إلى تضخم كبير الكروموسومات التي توفر فرصة فريدة لربط مورفولوجيا لونين مع توطين للبروتينات محددة. وبالتالي ، كان هناك مستوى عال من الاهتمام في تحديد تعديلات جينية موجودة في جينات مختلفة وفي مراحل مختلفة من عملية النسخ. أداة مهمة لمثل هذه الدراسات هو وضع العلامات من الكروموسومات كثور الخيوط الصبغية مع الأجسام المضادة للانزيم ، وعامل النسخ ، أو تعديل هيستون في المصالح. هذا البروتوكول فيديو يوضح تقنية الاسكواش المستخدمة في المختبر يوهانسن لإعداد ذبابة الفاكهة الكروموسومات كثور الخيوط الصبغية لوصفها الأضداد.
Protocol
Discussion
إدراج الأحماض الخل واللبن في البروتوكولات التقليدية التثبيت الاسكواش يسهل على حد سواء ، والقرار إنتربيرد الذراع الكروموسومات نشر ولكن للأسف بعض الحواتم لا ينجو من هذا العلاج. مثال على مثل هذا هو حاتمة H3S10ph (تساى وآخرون ، 2008). منذ حامض العلاج أيضا لديه عيب أن يروي …
Acknowledgements
نشكر السيدة ف Lephart لصيانة المخزونات يطير وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية الصحية للحصول على منحة (GM62916) والمؤسسة الوطنية للعلوم منح (MCB0817107).
References
- Cai, W., Bao, X., Deng, H., Jin, Y., Girton, J., Johansen, J., Johansen, K. M. RNA polymerase II-mediated transcription at active loci does not require histone H3S10 phosphorylation in Drosophila. Development. 135, 2917-2925 (2008).
- DiMario, P., Rosby, R., Cui, Z. Direct visualization of GFP-fusion proteins on polytene chromosomes. Dros. Inf. Serv. 89, 115-118 (2006).
- Johansen, K. M., Cai, W., Deng, H., Bao, X., Zhang, W., Girton, J., Johansen, J. Methods for studying transcription and epigenetic chromatin modification in Drosophila polytene chromosome squash preparations using antibodies. Methods. 48, 387-397 (2009).
