एंटीबॉडी लेबल के लिए ड्रोसोफिला Polytene क्रोमोजोम Squashes की तैयारी
Summary
यह वीडियो प्रोटोकॉल स्क्वैश Johansen प्रयोगशाला में इस्तेमाल तकनीक के लिए तैयार दिखाता है<em> ड्रोसोफिला</em> Polytene गुणसूत्रों एंटीबॉडी लेबलिंग के लिए.
Abstract
ड्रोसोफिला chromatin संरचना और जीन विनियमन कोशिकाविज्ञान विशाल तीसरे instar लार्वा की लार ग्रंथि polytene क्रोमोसोम द्वारा प्रदान की फायदे की वजह से के बीच संबंधों का अध्ययन करने के लिए लंबे समय से एक पसंदीदा मॉडल प्रणाली गया है. इस ऊतक में गुणसूत्रों सेल लगभग 1000 प्रतियां को जन्म देने के विभाजन के अभाव में नकल के कई दौर से गुजरना. डीएनए प्रत्येक replicative बहुत बढ़े क्रोमोसोम है कि एक अद्वितीय अवसर प्रदान करते हैं विशिष्ट प्रोटीन का स्थानीयकरण के साथ chromatin आकारिकी सहसंबंधी में जिसके परिणामस्वरूप चक्र के बाद गठबंधन बनी हुई है. नतीजतन, वहाँ विभिन्न जीनों पर epigenetic वर्तमान संशोधनों को परिभाषित करने में और प्रतिलेखन की प्रक्रिया के विभिन्न चरणों में ब्याज की एक उच्च स्तर दिया गया है. इस तरह के अध्ययन के लिए एक महत्वपूर्ण उपकरण polytene क्रोमोसोम के एंजाइम को एंटीबॉडी के साथ लेबलिंग, प्रतिलेखन कारक, या ब्याज की histone संशोधन है. यह वीडियो प्रोटोकॉल स्क्वैश Johansen प्रयोगशाला में इस्तेमाल किया एंटीबॉडी लेबलिंग के लिए ड्रोसोफिला polytene क्रोमोसोम तैयार तकनीक दिखाता है.
Protocol
Discussion
पारंपरिक स्क्वैश निर्धारण प्रोटोकॉल में एसिटिक और लैक्टिक एसिड के शामिल किए जाने के दोनों interband संकल्प और गुणसूत्र हाथ फैलाने की सुविधा है, लेकिन दुर्भाग्य से कुछ epitopes इस इलाज जीवित नहीं है. इस तरह के एक म…
Acknowledgements
हम इस काम के स्वास्थ्य (GM62916) अनुदान और राष्ट्रीय विज्ञान फाउंडेशन अनुदान (MCB0817107) के लिए राष्ट्रीय संस्थान द्वारा समर्थित किया गया मक्खी शेयरों की रखरखाव के लिए सुश्री वी. Lephart धन्यवाद.
References
- Cai, W., Bao, X., Deng, H., Jin, Y., Girton, J., Johansen, J., Johansen, K. M. RNA polymerase II-mediated transcription at active loci does not require histone H3S10 phosphorylation in Drosophila. Development. 135, 2917-2925 (2008).
- DiMario, P., Rosby, R., Cui, Z. Direct visualization of GFP-fusion proteins on polytene chromosomes. Dros. Inf. Serv. 89, 115-118 (2006).
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