抗体標識用ショウジョウバエ多糸染色体のカボチャの準備
Summary
このビデオプロトコルは準備するヨハンセン実験室で使用されているスカッシュのテクニックを示しています。<em>ショウジョウバエ</em抗体標識用>多糸染色体。
Abstract
ショウジョウバエは、長いクロマチン構造と三齢幼虫の巨大な唾液腺多糸染色体で提供される細胞診の利点のための遺伝子調節の関係を研究するためのお気に入りのモデルのシステムとなっています。この組織では染色体は、約1000枚を生じさせる細胞分裂がない場合の複製の多くのラウンドを受ける。 DNAは、特定のタンパク質の局在化とクロマチン形態を相関させるユニークな機会を提供大幅に拡大された染色体で、その結果、各複製サイクルの後に整列されたまま。その結果、別の遺伝子で、転写プロセスの異なる段階で存在するエピジェネティックな修飾を定義することに関心の高いレベルがあった。このような研究のための重要なツールは、酵素に対する抗体を持つ多糸染色体のラベリング、転写因子、または関心のヒストン修飾です。このビデオプロトコルは、抗体の標識にショウジョウバエ多糸染色体を準備するヨハンセンの実験室で使用されているスカッシュのテクニックを示しています。
Protocol
Discussion
従来のスカッシュ固定プロトコルの酢酸と乳酸を含めることは、拡散バンド間分解能と染色体腕の両方を促進するが、残念ながら、いくつかのエピトープは、この治療を生きていけない。そのようなエピトープの例は、H3S10ph（カイら 、2008）である。酸処理はまた、GFPタグ融合タンパク質、DiMario らの固有の蛍光を消光するという欠点を持っているので。 （2006）最近、GFP -抗体?…
Acknowledgements
私たちは、ハエの株式の維持のために氏V. Lephartに感謝この作品は、健康補助金（GM62916）と国立科学財団の助成金（MCB0817107）のための国立研究所によってサポートされていました。
References
- Cai, W., Bao, X., Deng, H., Jin, Y., Girton, J., Johansen, J., Johansen, K. M. RNA polymerase II-mediated transcription at active loci does not require histone H3S10 phosphorylation in Drosophila. Development. 135, 2917-2925 (2008).
- DiMario, P., Rosby, R., Cui, Z. Direct visualization of GFP-fusion proteins on polytene chromosomes. Dros. Inf. Serv. 89, 115-118 (2006).
- Johansen, K. M., Cai, W., Deng, H., Bao, X., Zhang, W., Girton, J., Johansen, J. Methods for studying transcription and epigenetic chromatin modification in Drosophila polytene chromosome squash preparations using antibodies. Methods. 48, 387-397 (2009).
