ميكروفلويديك المشارك ثقافة الخلايا الظهارية والبكتيريا للتحقيق في ذوبان الإشارات بوساطة التفاعلات
Summary
يصف هذا البروتوكول ميكروفلويديك شارك في ثقافة نموذج للثقافة في وقت واحد ومترجم من الخلايا الظهارية والبكتيريا. ويمكن استخدام هذا النموذج للتحقيق في دور الاشارات الجزيئية للذوبان في مختلف المرضية فضلا عن الشاشة فعالية من السلالات البكتيرية بروبيوتيك المفترضة.
Abstract
الإنسان الجهاز الهضمي (غي) المسالك هي بيئة فريدة من نوعها في الخلايا الظهارية التي المعوية وغير الممرضة – (المتعايشة) البكتيريا تتعايش. وقد اقترح أن المكروية أن واجه الممرض في طبقة المتعايشة مهم في تحديد مدى الاستعمار. الثقافة ليست الأساليب الحالية لتحقيق الاستعمار الممرض مناسب تماما عن التحقيق في هذه الفرضية لأنها لا تشارك في تمكين الثقافة من البكتيريا والخلايا الظهارية في بأسلوب يحاكي المكروية الجهاز الهضمي. نحن هنا وصف ميكروفلويديك شارك في ثقافة نموذج تمكن ثقافة مستقلة من الخلايا حقيقية النواة والبكتيريا ، واختبار تأثير الاستعمار المكروية المتعايشة على الممرض. ويتجلى النموذج المشترك من خلال تطوير ثقافة المتعايشة<em> القولونية</em> بيوفيلم بين خلايا هيلا ، تليها مقدمة من enterohemorrhagic<em> E. القولونية</em> (EHEC) في جزيرة المتعايشة ، في تسلسل الذي يحاكي تسلسل الأحداث في عدوى الجهاز الهضمي.
Protocol
Discussion
المقايسات التقليدية للمرفق الممرض والاستعمار الاستفادة من أحادي الطبقة من الخلايا حقيقية النواة في لوحات زراعة الأنسجة التي تضاف إلى مسببات الأمراض. هذه النماذج ليست ذات صلة من الناحية الفسيولوجية لأنها لا تشتمل على البكتيريا المتعايشة بيوفيلم المتقدمة على خلايا …
Acknowledgements
وأيد هذا العمل في جزء من مؤسسة العلوم الوطنية (CBET 0846453) ، والمعاهد الوطنية للصحة (1R01GM089999).
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| SU-8 2050 | Microchem Corp, MA | |||
| high-resolution (16,256 dpi) photolithography mask | Fineline-Imaging Inc, CO | |||
| Trichloro(3,3,4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,8-tridecafluorooctyl)silane | Sigma-Aldrich | 77279 | ||
| PDMS | Dow Corning, WI | 184 SIL ELAST KIT 0.5KG | ||
| DMEM | Thermo Scientific | SH30002.02 | ||
| Programmable spin coater | Laurell Tech Corp | WS0650S | ||
| Mask aligner | Neutronix-Quintel, PA | Q4000 | ||
| Oxygen plasma etcher | March Plasma System, CA | CS-1701 | ||
| Syringe pump | Harvard Apparatus, MA | |||
| Live/Dead Viability/Cytotoxicity Kit | Invitrogen | L-3224 |
References
- McDonald, J. C. Prototyping of microfluidic devices in poly(dimethylsiloxane) using solid-object printing. Anal Chem. 74, 1537-1545 (2002).
- Jeon, N. L. Design and fabrication of integrated passive valves and pumps for flexible polymer 3-dimensional microfluidic systems. Biomed Microdevices. 4, 117-121 (2002).
- Baek, J. Y., Park, J. Y., Ju, J. I., Lee, T. S., Lee, S. H. A pneumatically controllable flexible and polymeric microfluidic valve fabricated via in situ development. J Micromech Microeng. 15, 1015-1020 (2005).
- Grover, W. H., Ivester, R. H., Jensen, E. C., Mathies, R. A., A, R. Development and multiplexed control of latching pneumatic valves using microfluidic logical structures. Lab Chip. 6, 623-631 (2006).
- Lee, J., Jayaraman, A., Wood, T. K., K, T. Indole is an inter-species biofilm signal mediated by SdiA. BMC Microbiol. 7, 42-42 (2007).
- Hsu, C. H., Folch, A. Microfluidic devices with tunable topographies. Appl Phys Lett. 86, 023508-023508 (2005).
- Hui, E. E., Bhatia, S. N. Micromechanical control of cell-cell interactions. Proc Natl Acad Sci USA. 104, 5722-5726 (2007).
- Lee, J. Y. Integrating sensing hydrogel microstructures into micropatterned hepatocellular cocultures. Langmuir. 25, 3880-3886 (2009).
- Kim, J., Hegde, M., Jayaraman, A. Co-culture of epithelial cells and bacteria for investigating host-pathogen interactions. Lab-on-Chip. , (2009).
