マイクロ流体可溶性シグナルを介した相互作用を調査するために上皮細胞や細菌の共培養
Summary
このプロトコルは、上皮細胞や細菌の同時およびローカライズされた文化のためのマイクロ流体の共培養モデルを説明します。このモデルは、推定されるプロバイオティクス菌株の有効性を病因の異なる水溶性分子シグナルの役割を調べるだけでなく、画面に使用することができます。
Abstract
人間の胃腸（GI）管は、腸上皮細胞と非病原性（共生）細菌が共存するユニークな環境です。それは、病原体が共生層に遭遇する微小環境は、植民地化の程度を決定する上で重要であることが提案されている。病原体のコロニー形成を調べるための、現在の培養方法は、よく彼らは消化管の微小環境を模倣する方法で、細菌や上皮細胞の共培養を有効にしていないとしてこの仮説を調べるには適していません。ここでは、真核細胞や細菌の独立した文化を可能にするマイクロ流体共培養モデルを説明し、そして病原体の植民地で共生微環境の効果をテスト。共培養モデルは、共生を開発することにより実証される<em>大腸菌</em腸管出血性の導入に続いて、HeLa細胞の間で>バイオフィルム、<em> E.大腸菌</em>（EHEC）共生の島に、消化管の感染症の一連のイベントを模倣する順序が用いられる。
Protocol
Discussion
病原体付着と植民地化のための従来のアッセイは、病原体が追加されるに組織培養プレート中の真核細胞の単層を利用する。これらのモデルは、真核細胞で開発された共生細菌バイオフィルムが内蔵されていないとして、生理学的に適切ではありません。真核細胞への事前成長細菌培養の単純な加算では、細菌の存在下での培養真核細胞に、バイオフィルムは時間をかけて開発する高度に組?…
Acknowledgements
この作品は、国立科学財団（CBET 0846453）と国立衛生研究所（1R01GM089999）によって部分的にサポートされていました。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| SU-8 2050 | Microchem Corp, MA | |||
| high-resolution (16,256 dpi) photolithography mask | Fineline-Imaging Inc, CO | |||
| Trichloro(3,3,4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,8-tridecafluorooctyl)silane | Sigma-Aldrich | 77279 | ||
| PDMS | Dow Corning, WI | 184 SIL ELAST KIT 0.5KG | ||
| DMEM | Thermo Scientific | SH30002.02 | ||
| Programmable spin coater | Laurell Tech Corp | WS0650S | ||
| Mask aligner | Neutronix-Quintel, PA | Q4000 | ||
| Oxygen plasma etcher | March Plasma System, CA | CS-1701 | ||
| Syringe pump | Harvard Apparatus, MA | |||
| Live/Dead Viability/Cytotoxicity Kit | Invitrogen | L-3224 |
References
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