פרוטוקול זה מתאר מודל microfluidic שיתוף תרבות לתרבות סימולטני מקומי של תאים וחיידקים אפיתל. מודל זה יכול לשמש חוקר את תפקידם של אותות מולקולריים שונים מסיסים על הפתוגנזה, כמו גם מסך האפקטיביות של זני חיידקים פרוביוטיים המשוערת.
Abstract
האדם במערכת העיכול (GI) בדרכי היא סביבה ייחודית שבה תאים אפיתל מעיים פתוגניים שאינם (commensal) החיידקים להתקיים. הוצע כי microenvironment כי הפתוגן נתקל בשכבה commensal חשוב בקביעת מידת קולוניזציה. שיטות התרבות נוכחי לחקירת קולוניזציה הפתוגן לא מתאימים היטב לחקירת השערה זו כאשר הם אינם מאפשרים שיתוף התרבות של חיידקים ותאי אפיתל באופן המחקה את microenvironment מערכת העיכול. כאן אנו מתארים את מודל שיתוף microfluidic תרבות שמאפשרת תרבות עצמאית של תאים וחיידקים אוקריוטים, ובדיקת ההשפעה של microenvironment commensal על קולוניזציה הפתוגן. מודל שיתוף התרבות באה לידי ביטוי בפיתוח commensal<em> Escherichia coli</em> Biofilm בין תאים הלה, ואחריו הכנסת enterohemorrhagic<em> א coli</em> (EHEC) לתוך האי commensal, ברצף המחקה את רצף האירועים על דלקת בדרכי העיכול.
Protocol
1. המצאה של אדונים סיליקון באמצעות photolithography סטנדרטי SU-8 1 (לא רואים בסרט הזה). השתמש תקן SU-8 שיטות photolithography ליצור SU-8 "אדונים" (SU-8 2050, MicroChem, ניוטון, MA) בודה המרכיבים השונים (ממברנות PDMS של עובי שונות, שיתוף תרבו…
Discussion
מבחני קונבנציונלי עבור התקשרות קולוניזציה הפתוגן ולנצל monolayer של התאים האיקריוטים בצלחות בתרבית רקמה שאליו מתווספים פתוגנים. מודלים אלה אינם רלוונטיים מבחינה פיזיולוגית הם לא לשלב biofilm חיידקי commensal שפותחה על התאים האיקריוטים. בנוסף פשוטים של תרבות טרום גדל חיידקים ה…
Acknowledgements
עבודה זו נתמכה בחלקה על ידי הקרן הלאומית למדע (CBET 0846453) לבין המכון הלאומי לבריאות (1R01GM089999).
Kim, J., Hegde, M., Jayaraman, A. Microfluidic Co-culture of Epithelial Cells and Bacteria for Investigating Soluble Signal-mediated Interactions. J. Vis. Exp. (38), e1749, doi:10.3791/1749 (2010).