घुलनशील सिग्नल की मध्यस्थता सहभागिता जांच के लिए उपकला कोशिकाओं और बैक्टीरिया के सह संस्कृति Microfluidic
Summary
इस प्रोटोकॉल उपकला कोशिकाओं और जीवाणुओं के साथ – साथ और स्थानीय संस्कृति के लिए एक microfluidic सह संस्कृति मॉडल का वर्णन करता है. इस मॉडल रोगजनन पर अलग घुलनशील आणविक संकेतों की भूमिका की जांच के रूप में के रूप में अच्छी तरह से स्क्रीन ख्यात प्रोबायोटिक जीवाणु उपभेदों के प्रभाव के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है.
Abstract
मानव जठरांत्र संबंधी मार्ग (GI) एक अद्वितीय वातावरण में जो आंतों उपकला कोशिकाओं और गैर रोगजनक बैक्टीरिया (खानेवाला) एक समय में होना है. यह प्रस्ताव किया गया है कि microenvironment कि रोगज़नक़ खानेवाला परत में मुठभेड़ों उपनिवेशन की हद तक निर्धारण में महत्वपूर्ण है. रोगज़नक़ उपनिवेशण की जांच करने के लिए वर्तमान संस्कृति तरीकों को अच्छी तरह से इस परिकल्पना की जांच के रूप में वे एक तरह से है कि GI पथ microenvironment mimics में बैक्टीरिया और उपकला कोशिकाओं के सह संस्कृति सक्षम नहीं करते हैं करने के लिए अनुकूल नहीं हैं. यहाँ हम एक microfluidic सह संस्कृति मॉडल का वर्णन है कि यूकेरियोटिक कोशिकाओं और जीवाणुओं की स्वतंत्र संस्कृति के लिए सक्षम बनाता है, और रोगज़नक़ उपनिवेशण पर खानेवाला microenvironment के प्रभाव का परीक्षण. सह संस्कृति मॉडल खानेवाला विकासशील द्वारा प्रदर्शन किया है<em> Escherichia कोलाई</em> HELA कोशिकाओं के बीच biofilm, enterohemorrhagic का परिचय द्वारा पीछा<em> ई. कोलाई</em> (EHEC) खानेवाला द्वीप में, एक दृश्य है कि सैनिक पथ के संक्रमण में घटनाओं के अनुक्रम mimics.
Protocol
Discussion
रोगज़नक़ लगाव और उपनिवेशण के लिए परम्परागत assays टिशू कल्चर प्लेटों में यूकेरियोटिक कोशिकाओं में जो रोगज़नक़ों जोड़ रहे हैं की एक monolayer का उपयोग. इन मॉडलों physiologically प्रासंगिक नहीं है के रूप में वे एक खानेवाल?…
Acknowledgements
इस काम के हिस्से में राष्ट्रीय विज्ञान फाउंडेशन (0846453 CBET) और राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान (1R01GM089999) द्वारा समर्थित किया गया.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| SU-8 2050 | Microchem Corp, MA | |||
| high-resolution (16,256 dpi) photolithography mask | Fineline-Imaging Inc, CO | |||
| Trichloro(3,3,4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,8-tridecafluorooctyl)silane | Sigma-Aldrich | 77279 | ||
| PDMS | Dow Corning, WI | 184 SIL ELAST KIT 0.5KG | ||
| DMEM | Thermo Scientific | SH30002.02 | ||
| Programmable spin coater | Laurell Tech Corp | WS0650S | ||
| Mask aligner | Neutronix-Quintel, PA | Q4000 | ||
| Oxygen plasma etcher | March Plasma System, CA | CS-1701 | ||
| Syringe pump | Harvard Apparatus, MA | |||
| Live/Dead Viability/Cytotoxicity Kit | Invitrogen | L-3224 |
References
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