Микрожидкостных сотрудничества культуре эпителиальных клеток и бактерий по расследованию Растворимый Сигнал-опосредованного взаимодействия
Summary
Этот протокол описывает микрожидкостных совместно культуры модель для одновременного и локализованные культуры эпителиальных клеток и бактерий. Эта модель может быть использована для исследования роли различных растворимых молекулярные сигналы на патогенез, а также экран эффективности предполагаемых пробиотические бактериальные штаммы.
Abstract
Человека желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) является уникальной средой, в которой кишечных эпителиальных клеток и непатогенные (синантропных) бактерий сосуществовать. Было высказано предположение, что микроокружение, что возбудитель встречи в синантропных слой играет важную роль в определении степени колонизации. Современные методы исследования культуры возбудителя колонизация не очень хорошо подходит для исследования эту гипотезу, поскольку они не позволяют со-культуры бактерий и эпителиальных клеток, таким образом, что имитирует И. микроокружения-кишечного тракта. Здесь мы опишем микрожидкостных совместно культуры модель, которая позволяет независимым культура клеток эукариот и бактерий, и тестирование влияния микроокружения на синантропных возбудителя колонизации. Совместно культуры модели демонстрируют развивающиеся комменсальной<em> Кишечной палочки</em> Биопленки между клетками HeLa, с последующим введением Энтерогеморрагическая<em> Е. палочки</em> (EHEC) в синантропных острова, в последовательности, которая имитирует последовательность событий в инфекции желудочно-кишечного тракта.
Protocol
Discussion
Обычные анализы для возбудителя привязанности и колонизации использовать монослоя клеток эукариот в виде пластин культуры тканей, в которые добавляются патогенные. Эти модели не соответствующих физиологически так как они не включают бактериальные биопленки комменсальной разработа…
Acknowledgements
Эта работа была выполнена при частичной поддержке Национального научного фонда (конбет 0846453) и Национального института здоровья (1R01GM089999).
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| SU-8 2050 | Microchem Corp, MA | |||
| high-resolution (16,256 dpi) photolithography mask | Fineline-Imaging Inc, CO | |||
| Trichloro(3,3,4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,8-tridecafluorooctyl)silane | Sigma-Aldrich | 77279 | ||
| PDMS | Dow Corning, WI | 184 SIL ELAST KIT 0.5KG | ||
| DMEM | Thermo Scientific | SH30002.02 | ||
| Programmable spin coater | Laurell Tech Corp | WS0650S | ||
| Mask aligner | Neutronix-Quintel, PA | Q4000 | ||
| Oxygen plasma etcher | March Plasma System, CA | CS-1701 | ||
| Syringe pump | Harvard Apparatus, MA | |||
| Live/Dead Viability/Cytotoxicity Kit | Invitrogen | L-3224 |
References
- McDonald, J. C. Prototyping of microfluidic devices in poly(dimethylsiloxane) using solid-object printing. Anal Chem. 74, 1537-1545 (2002).
- Jeon, N. L. Design and fabrication of integrated passive valves and pumps for flexible polymer 3-dimensional microfluidic systems. Biomed Microdevices. 4, 117-121 (2002).
- Baek, J. Y., Park, J. Y., Ju, J. I., Lee, T. S., Lee, S. H. A pneumatically controllable flexible and polymeric microfluidic valve fabricated via in situ development. J Micromech Microeng. 15, 1015-1020 (2005).
- Grover, W. H., Ivester, R. H., Jensen, E. C., Mathies, R. A., A, R. Development and multiplexed control of latching pneumatic valves using microfluidic logical structures. Lab Chip. 6, 623-631 (2006).
- Lee, J., Jayaraman, A., Wood, T. K., K, T. Indole is an inter-species biofilm signal mediated by SdiA. BMC Microbiol. 7, 42-42 (2007).
- Hsu, C. H., Folch, A. Microfluidic devices with tunable topographies. Appl Phys Lett. 86, 023508-023508 (2005).
- Hui, E. E., Bhatia, S. N. Micromechanical control of cell-cell interactions. Proc Natl Acad Sci USA. 104, 5722-5726 (2007).
- Lee, J. Y. Integrating sensing hydrogel microstructures into micropatterned hepatocellular cocultures. Langmuir. 25, 3880-3886 (2009).
- Kim, J., Hegde, M., Jayaraman, A. Co-culture of epithelial cells and bacteria for investigating host-pathogen interactions. Lab-on-Chip. , (2009).
