Çözünür Sinyal aracılı Etkileşimleri Araştırılması için Epitel Hücreleri ve Bakteriler mikroakışkan Co-kültür
Summary
Bu protokol, eşzamanlı ve lokalize epitel hücreleri ve bakteri kültürü için bir mikroakışkan ortak kültür modeli açıklamaktadır. Bu model, varsayılan probiyotik bakteri suşlarının etkinliğini patogenezinde farklı çözünür moleküler sinyallerin rolünü araştıran gibi ekran için kullanılabilir.
Abstract
Insan gastrointestinal (Gİ) sistem bağırsak epitel hücreleri ve patojen olmayan (ortakçı) bakteri bir arada olduğu benzersiz bir ortam. Patojen komensal katmanında karşılaştığı mikroçevresinin kolonizasyon ölçüde belirlenmesinde önemli olduğu ileri sürülmektedir. Patojen kolonizasyon araştırmak için geçerli kültür yöntemleri de gastrointestinal sistem mikroçevresinin taklit bir şekilde bakteri ve epitel hücreleri birlikte kültür etkinleştirmek gibi bu hipotezi araştırmak için uygun değildir. Burada ökaryotik hücre ve bakteri bağımsız kültür sağlayan bir mikroakışkan ko-kültür modeli tanımlamak ve patojen kolonizasyon komensal mikroçevresinin etkisi test. Komensal gelişmekte olan ko-kültür modeli göstermiştir.<em> Escherichia coli</em> Enterohemorajik tanıtımı tarafından takip HeLa hücreleri arasındaki biyofilm<em> E. coli</em> Komensal ada (EHEC), gastrointestinal sistem enfeksiyonu olaylar dizisi taklit eden bir dizi.
Protocol
Discussion
Patojen eki ve kolonizasyon için Konvansiyonel Testler patojenlerin eklenir içine ökaryotik hücrelerin doku kültürü tabak tek tabaka kullanmaktadır. Bu modeller ökaryotik hücreleri üzerinde geliştirilen bir sofrada yemek yiyen bakteri biyofilm dahil değil gibi fizyolojik ilgili değildir. Basit ek ökaryotik hücrelere ön yetişen bir bakteri kültürü biyofilm zamanla gelişecek yüksek yapılar organize olarak bu konformasyon yol açması olası değildir ve neredeyse imkansız değilse kültür ökaryo…
Acknowledgements
Bu çalışma, Ulusal Bilim Vakfı (CBET 0.846.453) ve Ulusal Sağlık Enstitüleri (1R01GM089999) tarafından kısmen desteklenmiştir.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| SU-8 2050 | Microchem Corp, MA | |||
| high-resolution (16,256 dpi) photolithography mask | Fineline-Imaging Inc, CO | |||
| Trichloro(3,3,4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,8-tridecafluorooctyl)silane | Sigma-Aldrich | 77279 | ||
| PDMS | Dow Corning, WI | 184 SIL ELAST KIT 0.5KG | ||
| DMEM | Thermo Scientific | SH30002.02 | ||
| Programmable spin coater | Laurell Tech Corp | WS0650S | ||
| Mask aligner | Neutronix-Quintel, PA | Q4000 | ||
| Oxygen plasma etcher | March Plasma System, CA | CS-1701 | ||
| Syringe pump | Harvard Apparatus, MA | |||
| Live/Dead Viability/Cytotoxicity Kit | Invitrogen | L-3224 |
References
- McDonald, J. C. Prototyping of microfluidic devices in poly(dimethylsiloxane) using solid-object printing. Anal Chem. 74, 1537-1545 (2002).
- Jeon, N. L. Design and fabrication of integrated passive valves and pumps for flexible polymer 3-dimensional microfluidic systems. Biomed Microdevices. 4, 117-121 (2002).
- Baek, J. Y., Park, J. Y., Ju, J. I., Lee, T. S., Lee, S. H. A pneumatically controllable flexible and polymeric microfluidic valve fabricated via in situ development. J Micromech Microeng. 15, 1015-1020 (2005).
- Grover, W. H., Ivester, R. H., Jensen, E. C., Mathies, R. A., A, R. Development and multiplexed control of latching pneumatic valves using microfluidic logical structures. Lab Chip. 6, 623-631 (2006).
- Lee, J., Jayaraman, A., Wood, T. K., K, T. Indole is an inter-species biofilm signal mediated by SdiA. BMC Microbiol. 7, 42-42 (2007).
- Hsu, C. H., Folch, A. Microfluidic devices with tunable topographies. Appl Phys Lett. 86, 023508-023508 (2005).
- Hui, E. E., Bhatia, S. N. Micromechanical control of cell-cell interactions. Proc Natl Acad Sci USA. 104, 5722-5726 (2007).
- Lee, J. Y. Integrating sensing hydrogel microstructures into micropatterned hepatocellular cocultures. Langmuir. 25, 3880-3886 (2009).
- Kim, J., Hegde, M., Jayaraman, A. Co-culture of epithelial cells and bacteria for investigating host-pathogen interactions. Lab-on-Chip. , (2009).
